Микроскопическим признакам. Подтвердите локализацию эфирного масла в микропрепарате.

Согласно ГФ XI, вып. 2, статья 60 «Трава чабреца», стр. 338.

Трава чабреца – herba Thymi

Тимьян ползучий – Thymus serpyllum

Сем. Яснотковые – Lamiaceae

Сырье .

Собранная в фазу цветения, высушенная и обмолоченная трава тимьяна ползучего (чабреца).

Внешние признаки.

Смесь цельных или частично измельченных тонких веточек, листьев, кусочков стеблей толщиной до 0,5 см и цветков. Листья короткочерешковые, ланцетные, эллиптические или продолговато-эллиптические, цельнокрайние, длиной до 15 мм, голые или слабоопушенные с резко выступающими жилками на нижней стороне листа. Под лупой (10Х) по всей поверхности листа видны многочисленные буроватые точки (железки), у основания листа - длинные редкие щетинистые волоски. Кусочки веточек тонкие, четырехгранные, опушенные, зеленовато-коричневого или желтовато-бурого цвета, часто с фиолетовым оттенком, ветки мелкие, одиночные или собранные по нескольку штук в полумутовки. Каждый цветок состоит из двугубой чашечки и двугубого венчика. Чашечка длиной около 4 мм, снаружи опушенная; зубцы чашечки по краю с реснитчатыми волосками. Венчик длиной 5-8 мм, тычинок 4, пестик с четырехраздельной верхней завязью.

Цвет листьев - зеленый или серовато-зеленый; чашечки - буровато-красный; венчика - синевато-фиолетовый. Запах ароматный. Вкус горьковато-пряный, слегка жгучий.

Микроскопия.

При рассмотрении листа с поверхности видны клетки эпидермиса верхней и нижней сторон листа с извилистыми стенками; на верхнем эпидермисе иногда заметна складчатость кутикулы и четковидное утолщение стенок. Устьица имеются на обеих поверхностях листа и сопровождаются двумя околоустьичными клетками, расположенными перпендикулярно устьичной щели (диацитный тип). Эфиромасличные железки крупные, состоят из 8 выделительных клеток, расположенных радиально; клеткиэпидермиса вокруг места прикрепления железки иногда образуют розетку. Волоски трех типов: очень крупные, многоклеточные, бородавчатые волоски, расположенные у основания листа (выше по краю листа встречаются более мелкие волоски); голов­чатые волоски с овальной одноклеточной головкой на короткой одноклеточной ножке; сосочковидные выросты эпидермиса, глад­кие или слегка бородавчатые, чаще встречаются на верхней сто­роне листа и по краю.

Приготовление временного микропрепарата:

1. Просветление сырья: кусочки сырья помещают в пробирку и кипятят в 5% растворе натрия гидроксида 2-5 минут (в зависимости от толщины листа). Затем содержимое пробирки выливают в чашку, жидкость сливают, сырье промывают и оставляют в воде.

2. Приготовление микропрепарата:

s Препаровальной иглой берут кусочек сырья (листа), аккуратно отделяют верхний эпидермис и нижний эпидермис

s На предметное стекло капают каплю включающей жидкости – раствора хлоралгидрата

s Переносят кусочки эпидермиса на предметное стекло в каплю хлоралгидрата.

s Накрывают препарат покровным стеклом, таким образом, чтобы под стеклом не образовывалось пузырьков воздуха. При наличии воздуха под покровным стеклом, рядом с покровным стеклом капают каплю включающей жидкости (раствора хлоралгидрата), жидкость втягивается по стекло, замещая собой воздух.

3. Подготавливают микроскоп (настраивают свет).

4. Рассматривают микропрепарат вначале под малым, а затем под большим увеличением. Находят диагностические признаки: клетки эпидермиса, устьица, волоски.

Рассчитайте объём выборки, если на склад поступила партия сырья «Цветки календулы», состоящая из 25 единиц продукции (мешков). Оцените качество образца сырья на основании внешних признаков. Решите вопрос об условиях хранения данного вида сырья.

Согласно ГФ XI, вып. 1, статья «Правила приемки лекарственного растительного сырья и методы отбора проб для анализа», стр. 267.

Приемку лекарственного растительного сырья производят партиями.

Партией считают количество сырья массой не менее 50 кг одного наименования, однородного по всем показателям и оформленного одним документом, удостоверяющим его качество. Документ должен содержать следующие данные:

Номер и дату выдачи документа;

Наименование и адрес отправителя;

Наименование сырья;

Номер партии;

Массу партии;

Год и месяц сбора или заготовки;

Район заготовки (для сырья от дикорастущих растений);

Результаты испытаний качества сырья;

Обозначение нормативно-технической документации на сырье;

Подпись лица, ответственного за качество сырья, с указанием фамилии и должности.

Каждую единицу продукции подвергают внешнему осмотру для установления соответствия упаковки и маркировки требованиям нормативно-технической документации. Обращают внимание на правильность упаковки, состояние тары (отсутствие подмочки, подтеков и других повреждений, отрицательно влияющих на качество и сохранность сырья).

Для проверки соответствия качества сырья требованиям нормативно-технической документации отбирают выборку из поврежденных единиц продукции, взятых из разных мест партии в количестве, указанном в табл. 1. Проверку качества сырья в поврежденных единицах продукции производят отдельно от неповрежденных, вскрывая каждую единицу продукции.

Попавшие в выборку единицы продукции вскрывают и путем внешнего осмотра определяют однородность сырья по способу подготовки (цельное, измельченное, прессованое и т. д.), цвету, запаху, засоренности; наличие плесени, гнили устойчивого постороннего запаха, не исчезающего при проветривании; засоренность ядовитыми растениями и посторонними примесями (камни, стекло, помет грызунов и птиц и т. д.). Одновре­менно невооруженным глазом и с помощью лупы (5-10X) определяют наличие амбарных вредителей.

При установлении (внешний осмотр) неоднородности сырья, наличия плесени и гнили, засоренности посторонними растениями в количествах, явно превышающих допустимые примеси и т. д. вся партия должна быть рассортирована, после чего вторично предъявлена к сдаче.

При обнаружении в сырье затхлого, устойчивого посторон­него запаха, не исчезающего при проветривании, ядовитых растений и посторонних примесей (помет грызунов и птиц, стекло и др.), зараженности амбарными вредителями II и III степеней партия сырья не подлежит приемке.

Согласно условию задачи и требованиям нормативной документации, из 25 единиц продукции необходимо отобрать 5 единиц продукции для формирования выборки.

Согласно ГФ XI, вып. 2, статья 5 «Цветки ноготков», стр. 237.

Цветки календулы – Flores Calendulaе

Календула лекарственная - Calendula officinalis

Сем. Астровые – Asteraceae.

Сырье.

Собранные в начале распускания трубчатых цветков и высу­шенные цветочные корзинки культивируемого однолетнего травя­нистого растения ноготков лекарственных (календулы лекарст­венной).

Внешние признаки.

Цельные или частично осыпавшиеся кор­зинки диаметром до 5 см, без цветоносов или с остатками цве­тоносов длиной не более 3 см. Обвертка серо-зеленая, одно-двухрядная; листочки ее линейные, заостренные, густоопушенные. Цветоложе слегка выпуклое, голое. Краевые цветки языч­ковые, длиной 15-28 мм, шириной 3-5 мм с изогнутой короткой опушенной трубкой, трехзубчатым отгибом, вдвое превышающим обвертку, и 4-5 жилками. Цветки расположены в 2-3 ряда у немахровых и в 10-15 рядов у махровых форм. Пестик с изог­нутой нижней одногнездной завязью, тонким столбиком и двух­лопастным рыльцем. Срединные цветки трубчатые с пятизубчатым венчиком. Цвет краевых цветков красновато-оранжевый, оранжевый, ярко- или бледно-желтый; срединных - оранжевый, желтовато-коричневый или желтый. Запах слабый. Вкус солоно­вато-горький.

Календула лекарственная (Calendula officinalis L.), однолетнее травянистое растение семейства сложноцветных (Compositae), высотой до 75 см, с сильным своеобразным запахом. Корень ветвистый, стержневой. Стебель прямостоячий, простой или слабо разветвленный, густо олиственный. Листья очередные, покрытые волосками, нижние - лопатовидные, верхние - продолговатые или ланцетные. Цветки в соцветиях - корзинках, краевые - язычковые, женские; срединные - трубчатые, оранжевого или желтого цвета, обоеполые, бесплодные. Плод - согнутая семянка без хохолка; наружная поверхность покрыта бугорками и острыми шипиками. Цветет календула лекарственная с июня по октябрь, плоды созревают в июле-сентябре. Период цветения и созревания семян очень растянут из-за большого числа побегов высших порядков. Размножается семенами. Культивируется как лекарственное и декоративное растение, иногда дичает. Растение не требовательно к теплу, влаге, почве, но светолюбиво. В диком виде календула произрастает в Южной Европе, Передней Азии и на Ближнем Востоке. Календулу разводили в большом количестве в XV веке во Франции. Календула (ноготок) была любимым цветком королевы Наваррской Маргариты Валуа. И сейчас в Париже в Люксембургском саду стоит статуя королевы с цветком календулы в руках. Как лекарственное растение календула была известна уже в Древней Греции. Из письменных источников известно, что в XII веке растение применялось для лечения гнойных ран, а в XVII веке - язвенных заболеваний, скрофулеза, фурункулеза.

Сбор и сушка сырья . Заготавливают свежераспустившиеся соцветия календулы (Flores Calendulae) в фазе раскрытия в них не менее половины язычковых цветков. За лето делают 10-20 сборов. При систематической частой уборке образуются новые соцветия, и цветение продолжается до заморозков, от чего урожай повышается. Опоздание с проведением сбора приводит к завязыванию семян, снижению интенсивности цветения и ухудшению качества семян. В период цветения календулы ее соцветия раскрываются через каждые 3 дня, в последующем - через 4-5 дней и реже. Корзинки срезают у самого основания цветоноса. Сушат не более 4 ч в воздушных сушилках при температуре 40-45 °С, расстилая тонким слоем. Сушка считается законченной, если при надавливании на соцветия они распадаются. Срок годности сырья 2 года. Запах сырья слабый, ароматный, вкус горьковатый с ощущением слизистости. Сырье экспортируется. Основные районы заготовки - европейская часть России, Беларусь, Украина, Северный Кавказ.

Химический состав . В цветочных корзинках растения содержатся каротиноиды (около 3%) - каротин, рубиксантин, ликопин, цитроксантин, виолоксантин, флавохром, флавоксантин и др. Также в цветках календулы найдены углеводороды парафинового ряда (ситостерин и гентриаконтан), смолы (около 3,4%), тритерпеновые гликозиды, флавоноиды (нарциссии, изокверцитрин, рамнетин), эфирное масло (около 0,02%), инулин, слизистые (2,5%) и горькие вещества (календен - до 10%), органические кислоты [яблочная (до 6,8%), салициловая и др.], аскорбиновая кислота. В надземной части обнаружено до 10% горького вещества календена, имеющего ненасыщенный характер; в семенах - жирное масло, представленное глицеридами преимущественно лауриновой и пальмитиновой кислот, алкалоиды; в корнях - инулин и рядтритерпеновых гликозидов, являющихся производными олеаноловой кислоты.

В соцветиях календулы содержатся: зола - 8,01%; макроэлементы (мг/г): К - 29,80, Ca - 11,40, Mn - 2,50, Fe - 0,15; микроэлементы (КБН): Мg - 0,20, Cu - 0,86, Zn - 1,31, Со - 0,03, Мо - 1,47, Cr - 0,09, Al - 0,05, Se - 4,20, Ni - 0,25, Sr - 0,10, Pb -0,03,1 - 0,05. В - 48,40 мкг/г. Не обнаружены Ва, V, Li, Au, Ag, Br. Концентрирует Zn, Cu, Мо, Se.

Фармакологические свойства . Основными свойствами галеновых форм и фитопрепаратов из календулы лекарственной являются противовоспалительные, ранозаживляющие, бактерицидные, спазмолитические и желчегонные. Расслабляя гладкомышечные структуры таких органов, как желудок, кишечник и печень, календула вместе с тем возбуждает секреторную активность, что способствует усилению желчеобразования и желчеотделения и повышению секреторной активности желудка. Наилучшие результаты наблюдаются при применении календулы вместе с ромашкой аптечной и тысячелистником обыкновенным. В результате действия комплексного препарата из этих растений улучшается желчевыделительная функция печени, устраняется застой желчи в желчном пузыре.

Препараты календулы ускоряют процессы регенерации тканей, ускоряют рост и улучшают качество грануляций, способствуют более быстрой эпителизации и формированию более нежного рубца. При применении внутрь они проявляют свою противовоспалительную активность, способствуют регенерации слизистых оболочек желудка и кишечника, заживлению язв и эрозий. Механизм защитного действия препаратов календулы складывается из снижения агрессивности желудочного сока и повышения резистентности слизистой оболочки желудка. Календула, оказывая седативное, мягкое гипотензивное действие, способствует нормализации сердечной деятельности и уменьшает отеки.
В народной медицине отмечают противовоспалительное, бактерицидное, седативное, антитоксическое, спазмолитическое, мочегонное, антимитотическое свойства календулы лекарственной.

Применение в медицине . Цветки. Настой, настойка (внутрь) - при гастрите, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, колитах, энтероколитах, заболеваниях печени, болезнях селезенки; при гипертонии, сердечных заболеваниях, сопровождающихся сердцебиением, одышкой, отеками; при как симптоматическое средство; наружно (в виде полосканий) - при болезнях полости рта (молочница у детей), при воспалительных заболеваниях верхних дыхательных путей, ангинах; в виде клизм - при лечении проктитов и парапроктитов; в виде спринцеваний - при эрозии шейки матки, трихомонадньгх кольпитах и др. Настойка, настой, мазь - как противовоспалительное и ранозаживляющее средство при ушибах, ссадинах, мелких ранах, пролежнях, гангренах, свищах, ожогах, обморожениях, фурункулах, угрях. Растение применяется в гомеопатии. В народной медицине отвар соцветий - при заболеваниях печени; для предупреждения выкидышей у беременных после ушиба; при маточных кровотечениях, женских заболеваниях, лихорадке, простуде; промывают им раны; используют при диатезе и детских экземах. Сок (внутрь) - при стенокардии, гипертонической болезни, атеросклерозе, неврозах и климаксе; для лечения гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, колитов, энтероколитов; наружно (в виде полосканий) - при насморке; в виде клизм - при проктитах, трещинах заднего прохода, воспалении прямой кишки; в виде спринцеваний - при эрозии шейки матки, белях, трихомонадном кольпите. В Бразилии цветки календулы применяются в качестве вспомогательного препарата при лечении злокачественных опухолей. В немецкой народной медицине - при ранах, ушибах, язвах, фурункулезе, расширении вен; в польской - при болезнях печени. В корейской медицине отвар и спиртовая настойка применяются при ожогах (в виде пластырей), ушибах, геморроидальных трещинах (в виде клизм), при фурункулезе и крупных нарывах. Настой и настойка - при стоматите и пиорее в качестве дезинфицирующего средства, а также для спринцевания при свищах матки, эрозии шейки матки и трихомонадном кольпите (2% настойка). Настой и настойка используются, кроме того, в корейской медицине в качестве противовоспалительного и желчегонного средства при язве желудка и двенадцатиперстной кишки, гепатите и воспалении желчных протоков, а также при высоком артериальном давлении и ряде сердечных заболеваний. Смесь из порошка лепестков и никотиновой кислоты - в качестве симптоматического средства при неоперабельном раке желудка, а смесь с окисью железа в качестве антианемического средства.

Лекарственные формы, способ применения и дозы . Настойка календулы (Tinctura Calendulае). Спиртовая (на 70% спирте) настойка (1:10) цветков и цветочных корзинок. Прозрачная жидкость желтого цвета. Для употребления разводят 1 чайную ложку в стакане воды. Как желчегонное средство принимают по 10-20 капель на прием.

Настой цветков календулы (Infusum florum Calendulae): 20 г (2 столовые ложки) сырья помещают в эмалированную посуду, заливают 200 мл горячей кипяченой воды, закрывают крышкой и нагревают в кипящей воде (на водяной бане) при частом помешивании 15 мин, охлаждают 45 мин при комнатной температуре, процеживают, оставшееся сырье отжимают. Объем полученного настоя доводят кипяченой водой до 200 мл. Приготовленный настой хранят в прохладном месте не более 2 суток. Принимают в теплом виде по 1-2 столовые ложки 2-3 раза в день. В виде клизм (1 чайная ложка настоя на 1/4 стакана воды) - при проктитах. Настой ноготков в смеси с равным объемом 3% раствора борной кислоты вводят в канал свища, что способствует его рассасыванию.

Мазь "Календула" (Unguentum Calendulae) состоит из 20 г настойки календулы и 90 г эмульсии консистентной (вода/вазелин), желтоватого цвета. Выпускается в стеклянных банках по 40 г. Хранят в прохладном месте. Применяют при ожогах, порезах, трещинах губ, сосков, при ушибах, экземе и др.

Калефлон (Caleflonum) - очищенный экстракт из цветков календулы. Выпускается в таблетках по 0,1 г, светло-коричневого (до темно-коричневого) цвета со слабым специфическим запахом. Принимают по 0,1-0,2 г 3 раза в день после еды. Курс лечения 3-6 недель. Назначают в качестве противовоспалительного и стимулирующего репаративные процессы при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, при хронических гастритах и энтеритах. Препарат можно назначать вместе со спазмолитическими средствами. При приеме препарата возможно ощущение горечи во рту, жжение в подложечной области. При выраженных побочных явлениях препарат отменяют.

* Сок календулы: отжимают из цветочных корзинок и язычковых цветков растений. Принимают по 20-40 капель со столовой ложкой меда на стакан молока 2-3 раза в день до еды. Наружно применяют в разведении 1:2 или 1:3.
* Мазь из календулы: смешивают 10 г измельченных в порошок цветков с 50 г вазелина.

Применение в других областях . Цветки календулы используются в пищевой промышленности при производстве маргарина, масла, сыра и других продуктов для окраски и ароматизации. Широко применяется в косметике, входит в состав различных кремов. Из цветков получают желтую краску. Имеются сведения, что стоит посадить календулу на участок с розами - и они перестанут повреждаться нематодами. Культивируется. На Украине средний урожай 10 ц/га. При хорошей агротехнике урожай воздушно-сухих соцветий достигает 12-18 ц/га.

Элементы агротехники возделывания . Календула лекарственная требовательна к плодородию почвы, поэтому в севообороте ее размещают после хорошо удобренных пропашных культур. Выращивать ее на одном месте несколько лет подряд не рекомендуется, так как она сильно истощает почву. Участок осенью перекапывают и вносят 3-4 кг навоза, 40 г суперфосфата и 10 г аммиачной селитры на 1 м. При отсутствии навоза на ту же площадь вносят 15 г аммиачной селитры, 10 г калийной соли и 60 г суперфосфата. Сеют семена в сроки посева ранних яровых культур с междурядьями 50-60 см, на глубину 2-3 см. Одновременно с посевом семян в почву вносят 30-40 г гранулированного суперфосфата на 1 м. Семена прорастают при температуре 20-30 °С. Всходы появляются через 6-12 дней после посева, начинает цвести календула через 38-50 дней, созревает через 60-75 дней. Уход состоит из 2-3 рыхлений междурядий, в зависимости от уплотнения почвы. По мере разрастания и смыкания растений в междурядьях обработка прекращается. Подкормок в течение вегетации не требуется. Обильное цветение календулі лекарственной достигается постоянным и полным удалением соцветий. Растения лучше развиваются на открытом, хорошо освещенном участке.

Calendulae (Flores Calendulae officinalis) цветки ноготков (календулы)

Собранные вручную в начале распускания трубчатых цветков (когда распустилось не менее половины язычковых цветков у махровых форм и 2-4 круга трубчатых у немахровых форм) или механизированным способом в фазу массового цветения, высушенные цветочные корзинки культивируемого однолетнего травянистого растения ноготки (календула) Calendula officinalis L., сем. Сложноцветные Asteraceae; используют в качестве лекарственного средства и лекарственного сырья.

Ноготки однолетнее травянистое растение высотой 30-60 (90) см. Стебли ребристые, слабо опушенные жесткими волосками, густоолиственные, ветвистые. Листья очередные, обратно-яйцевидные или продолговато-ланцетные, цельнокрайние или слегка зубчатые. Цветки, собранные в крупные корзинки до 8 см в диаметре у махровых и до 5 см у немахровых форм, расположены одиночно на верхушке главного стебля и боковых ответвлений; краевые цветки ложноязычковые, пестичные, плодущие, оранжево-красные или желтые, срединные трубчатые, бесплодные, оранжевые или коричневато-красные. Плоды семянки различной формы и величины, у махровых форм преимущественно серповидно крючкообразные.

Широко культивируются как лекарственное и декоративное растение. Основные районы промышленного возделывания ноготков Украина, Беларусь, Молдова, в России - Краснодарский край и Поволжье.

Часто выращиваются сорта Кальта и Рыжик.

Химический состав. Цветки ноготков содержат каротиноиды (до 3% в язычковых цветках): - и -каротины, ликопин, лютеин, виолаксантин, флавоксантин, рубиксантин и др.; флавоноиды (0,33-0,88%): изорамнетин, изорамнетин-глюкопиранозид, кверцитрин, изорамнетин-глюкопиранозил-6-1-рамнофуранозил; кумарины; дубильные вещества (6,4%); полисахариды (слизь 2,5-4,0%), эфирное масло (0,02%), горечи (календен), смолы (около 3,4%), тритерпеновые соединения, органические кислоты, следы алкалоидов. Содержание каротиноидов в сырье коррелирует со степенью махровости соцветий, а также зависит от способа сушки и условий хранения. Заготовка, первичная обработка и сушка. Ноготки цветут продолжительное время (до 3 месяцев), поэтому сбор цветков проводят многократно с начала цветения до заморозков. При ручном сборе цветочные корзинки обрывают без цветоноса или с цветоносом длиной до 3 см через каждые 3-4 дня в первый период цветения и через 4-6 дней в последующем. За сезон проводят 15-18 сборов. Своевременное и регулярное удаление соцветий с растений способствует завязыванию все новых бутонов и обеспечивает получение высоких урожаев до 12-18 ц/га. Собранное сырье очищают от примеси листьев, кусочков стеблей, отцветших корзинок.

Механизированную уборку проводят ромашкоуборочными машинами очесывающего типа. Число сборов сырья при этом значительно сокращается, так как наряду с корзинками обрываются побеги с бутонами. Из сырья механизированной уборки при послеуборочной доработке удаляют примесь листьев, стеблей, цветоносов, чтобы содержание этих частей растения в сырье не превышало 25%.

Сушат цветки ноготков в сушилках при температуре 50-60 (70)С, реже в воздушных сушилках или хорошо проветриваемых помещениях, разложив на ткани или бумаге слоем в одно соцветие. Высушенное сырье должно сохранять естественную окраску.

Стандартизация. Качество сырья регламентировано требованиями ГФ XI, ВФС 42-1738-87 и Изменениями № 2 от 20.05.97 г.

Внешние признаки. Сырье ручного сбора представляет собой цельные или частично осыпавшиеся корзинки диаметром до 5 см, без цветоносов или с остатками цветоносов длиной не более 3 см. Обертка одно- и двухрядная, серо-зеленая, из линейных заостренных густоопушенных листочков. Цветоложе слегка выпуклое, голое. Краевые цветки ложноязычковые, длиной 15-28 мм, шириной 3-5 мм с изогнутой короткой опушенной трубкой, с трехзубчатым отгибом вдвое превышающим обертку и 4-5 жилками, расположены в 2-3 ряда у немахровых и в 10-15 рядов у махровых форм. Пестик с изогнутой нижней одногнездной завязью, тонким столбиком и двухлопастным рыльцем. Срединные цветки трубчатые с пятизубчатым венчиком. Цвет краевых цветков красновато-оранжевый, оранжевый или желтый, срединных оранжевый, желтовато-коричневый или желтый. Запах слабый, вкус солоновато-горький.

Сырье механизированной уборки значительно отличается по внешним признакам от сырья ручного сбора. Оно представляет собой смесь цельных или частично осыпавшихся соцветий, отдельных трубчатых и язычковых цветков, реже бутонов и корзинок с семенами различной степени созревания, отдельных семянок, а также кусочков стеблей и листьев.

Порошок. Смесь частиц, проходящих сквозь сито по ТУ 23.2.2068-89 с отверстиями диаметром 2 мм. Цвет зеленовато-оранжевый или зеленовато-желтый. Запах слабый. Вкус солоновато-горький.

Микроскопия. При рассмотрении язычковых цветков с поверхности видны удлиненные клетки эпидермиса с оранжевыми округлыми хромопластами. На зубчиках эпидермис с сосочками, иногда с устьицами. Трубка венчика густо опушена простыми и железистыми одно-двухрядными волосками; завязь также опушена: с выпуклой стороны железистыми, по краям вогнутой стороны простыми двухрядными волосками. Головка железистых волосков состоит из 2, 4 или 6 клеток. Эпидермис трубчатых цветков такой же, как у язычковых, но у зубчиков он с более вытянутыми сосочками. Нижняя часть трубки венчика и завязь густо опушены одно-двухрядными железистыми, реже двухрядными простыми волосками. На отдельных участках эпидермиса просматривается складчатость кутикулы (рис.). Пыльца округлая, шиповатая.

Эпидермис листочков обертки по краю представлен удлиненными клетками с прямыми стенками, в средней части извилистыми с устьицами. Имеется густое опушение: по краю простыми одно-двухрядными, двухрядными железистыми и ветвистыми волосками; в средней части только железистыми волосками.

Для микроскопии порошка используют частицы, полученные при просеве аналитической пробы сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. В препарате видны обрывки вышеперечисленных диагностических признаков всех частей корзинки.

Числовые показатели. Цветки ручного сбора. Экстрактивных веществ, извлекаемых 70%-ным спиртом, не менее 35%; влаги не более14%; золы общей не более 11%; остатков цветоносов, в том числе отделенных от корзинок при анализе, не более 6%; корзинок с полностью осыпавшимися язычковыми и трубчатыми цветками (цветоложа с обертками) не более 20%; побуревших корзинок не более 3%; других частей растения (кусочков стеблей и листьев) не более 3%; органической примеси не более 0,5%, минеральной не более 0,5%.

Цветки механизированной уборки. Нормы содержания экстрактивных веществ, влаги, золы общей и побуревших корзиной установлены такие же, как для сырья ручной уборки; других частей растения (листьев, стеблей, цветоносов, в том числе отделенных при анализе) не более 25%; корзинок с плодами и отдельных плодов не более 10%; органической примеси не более 3%, минеральной не более 1%.

Порошок. Нормы содержания экстрактивных веществ, влажности, золы общей такие же; дополнительно частиц, проходящих сквозь сито по ТУ 23.2.2068-89 с отверстиями диаметром 2 мм, не более 10%.

Хранение. Хранят цветки ноготков в сухих, хорошо проветриваемых помещениях, на стеллажах. Срок годности сырья 2 года.

Использование. Цветки ноготков применяют как ранозаживляющее, противовоспалительное и бактерицидное средство. Настой применяют как желчегонное, противовоспалительное при желудочно-кишечных заболеваниях и в виде инъекций при свищах; настойку при ангине, тонзиллите, гингивите, для уменьшения кровоточивости десен, в стоматологии для лечения парадонтоза, в терапии кольпитов, проктитов, эрозии шейки матки; мазь и настойку при ушибах, порезах, инфицированных ранах, ожогах, фурункулезе, настойка входит в состав мази «Календула». Препарат «Калефон» при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, при хронических гастритах. Жидкий экстракт ноготков входит в комплексные препараты «Ротокан», «Алором», обладающие противовоспалительным действием, гемостатическими свойствами, усиливающие процессы регенерации слизистых оболочек. Применяется в гомеопатии. Входит в состав БАД.

Формула цветка

Формула цветка ноготков лекарственных: ♂♀ * Ч(5)Л(5)Т(5)П1.

В медицине

Цветки ноготков применяют как наружное средство для полосканий в стоматологии при болезнях полости рта (стоматит, гингивит, пародонтит, молочница у детей, пиорея, воспалительно-дистрофическая форма парадонтоза). В гастроэнтерологии ноготки применяются при гастритах, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, колитах, энтероколитах, при заболеваниях печени. В гинекологии – в виде спринцеваний для лечения эрозий шейки матки и трихомонадных кольпитов.

Также настой ноготков применяют в виде полосканий при лечении тонзиллитов, а в комплексе с сульфаниламидными препаратами и антибиотиками - для лечения ангин; в виде клизм – в терапии проктитов и парапроктитов.

Настойки, мази, эмульсии, свежий сок растения используют наружно при мелких ранах, порезах, ушибах, ожогах, фурункулезе, блефаритах.

Цветки ноготков лекарственных входят в состав многих сборов и биологически активных добавок.

Как краситель

Цветки ноготков отличаются яркой окраской. Это связано с содержанием в растении красителя календулина, который применяют для окрашивания масла, сыров, супов, соусов, теста. А продукты и различные блюда ценятся не только за их вкус и аромат, но и за их внешний вид, за то, что они радуют глаз. Календулин хорошо растворяется в жирах, а поэтому, если вы хотите придать красивый оттенок тесту, надо сначала проварить в молоке лепестки растения.

В косметологии

Ноготки широко используются в косметологии. Настойку из соцветий ноготков можно применять в виде компрессов при уходе за кожей с жирной себореей и угревой сыпью. С той же целью можно использовать крем с экстрактом растения, который оказывает благоприятное действие на кожу после солнечных и других ожогов, способствует заживлению порезов и трещин, смягчает кожу и вызывает чувство свежести.

В цветоводстве

Садоводы любят ноготки за их яркий внешний вид и за долгое цветение (с июня до глубокой осени). Существует много сортов растений, во многих странах широко культивируют махровые и темно-оранжевые сорта. Ноготки светолюбивы, нетребовательны к почвам, но лучше растут на увлажненных участках. Опытные цветоводы знают, что для продолжительного цветения очень полезно срывать цветочные корзинки. Размножаются ноготки семенами. Для следующих посевов семена лучше всего собирать в августе - сентябре.

Классификация

Растение ноготки лекарственные, или календула лекарственная (лат. Calendula officinalis L.), относится к семейству Астровых (лат. Asteraceae). Род Ноготки ((лат. Calendula) насчитывает до 20 видов растений.

Ботаническое описание

Календула лекарственная (ноготки лекарственные) - однолетнее травянистое растение высотой до 50-60 см со специфическим ароматом. Корень стержневой, разветвленный. Стебель прямостоячий, ветвистый, в верхней части покрыт железистыми волосками. Листья очередные, светло-зеленые, покрыты волосками; нижние – черешковые, обратнояйцевидные, удлиненные, верхние – сидячие, ланцетовидные. Цветки золотисто-желтые или оранжевые, собранные в большие (диаметром 4-7 см) верхушечные корзинки. Краевые цветки язычковые, пестичные. Средние – трубчатые, пятизубчатые, с недоразвитым пестиком и пятью тычинками. Цветет с июня до осенних заморозков. Формула цветка ноготков лекарственных - ♂♀ * Ч(5)Л(5)Т(5)П1.Плоды – дугообразно изогнутые бородавчатые семянки, располагающиеся в 2-3 ряда, созревают с июля.

Распространение

В диком виде календула лекарственная (ноготки лекарственные) встречается в среднеземноморских странах Европы, Африки и Азии, распространяясь на Ближний Восток к Ирану. Некоторые ботаники считают, что календула лекарственная (ноготки лекарственные) является давним естественным гибридом календулы полукустарниковой (C. suffruticosa), произрастающей в Южной Европе, и календулы звездчатой (C. stellata), распространенной в Африке.

Ноготки культивируют во многих странах Европы (Германия, Австрия, Венгрия, Польша), в том числе в России, Украине, Беларуси, а также в США и Средней Азии.

Регионы распространения на карте России.

Заготовка сырья

Как лекарственное сырье используются ноготков цветки (Calendulae flores). Сбор цветочных корзинок начинают в период массового цветения. Срывают растения с горизонтально расположенными язычковыми цветками и частично распустившимися трубчатыми цветками. За летний период можно сделать от 10 до 20 сборов соцветий. При систематическом частом сборе образуются новые соцветия. После предварительного подвяливания на солнце сырье сушат в тени на свежем воздухе, на хорошо проветриваемых чердаках или в сушилке при температуре 40-45°С, расстилая тонким слоем. Сырье является официнальным в России и во многих зарубежных странах. В Германии для производства лекарственных препаратов используют все растение вместе с корнем (Herba Calendulae).

Химический состав

В цветочных корзинках ноготков лекарственных содержатся каротиноиды (до 3%) - каротин, рубиксантин, ликопин, цитроксантин, виолоксантин, флавохром, флавоксантин и др. (15 соединений). В сортах ноготков с темно-оранжевыми язычковыми цветками каротиноидов почти в 10 раз больше, чем в сортах с желтыми язычковыми цветками.

Также в цветках ноготков обнаружены углеводороды парафинового ряда (гентриаконтан и ситостерин), смолы, тритерпеновые гликозиды, слизистые и горькие вещества, органические кислоты (яблочная, салициловая), аскорбиновая кислота. В экстрактах ноготков выявлены тритерпеновые сапонины - гликозиды олеаноловой кислоты, названые календулозидами А, В, С, D, E, F, G, H. Содержимое суммы гликозидов олеаноловой кислоты в корнях и надземной части ноготков лекарственных колеблется от 4 до 5%.

В соцветиях ноготков выявлено 8 флавоноидов (рамнетин, изорамнетин-3-глюкозид, изокверцитрин и др.). Их количество колеблется в зависимости от сорта и популяции в пределах 0,26–0,91%, причем богаты флавоноидами сорта с махровыми оранжевыми соцветиями.

В цветках ноготков и в других органах растения присутствуют тритерпеновые соединения: спирты (до 5%) и олеаноловая кислота. Из соцветий растения выделен полисахарид, в состав которого входит арабиноза, галактоза, глюкоза, рамноза и ксилоза.

В соцветиях ноготков содержится 0,05–0,2% эфирного масла, причем в цветоложе его больше (до 0,4%), чем в язычковых цветках (до 0,12%). Кроме того, в соцветиях растения найдено небольшое количество кумаринов (скополетин, умбелиферон и эскулетин), смолистые (до 3,44%) и дубильные вещества, слизь (до 2,5%), следы алкалоидов и микроэлементы.

Во всех органах ноготков содержатся стерины, особенно много их в листьях (до 18%). Из листьев растения выделены токоферолы и горечь календен.

Фармакологические свойства

Настой цветков ноготков обладает противовоспалительным, антисептическим и желчегонным действием. Фитонцидные свойства настоя обусловлены эфирным маслом растения.

Несмотря на то, что бактерицидное действие растения по отношению к стрептококкам и стафилококкам выражены незначительно, в целом процессы воспаления, осложненные бактериальной флорой, при действии препаратов ноготков протекают более благоприятно, по-видимому, за счет усиления роста грануляций, улучшения эпителизации и повышения местных защитных механизмов.

Цветки календулы (ноготков) обладают спазмолитическими свойствами. Расслабляя гладкомышечные структуры таких органов, как желудок, кишечник и печень, растение также возбуждает секреторную активность, что способствует усилению желчеобразования и желчеотделения и повышению секреторной активности желудка.

На кафедре стоматологии Киевского медицинского института проводились клинические исследования цветков ноготков для лечения воспалительно-дистрофической формы пародонтоза. Клинические наблюдения показали, что обильное орошение полости рта водным раствором настойки ноготков до и после удаления зубных камней, закладывание турунд, обильно смоченных неразведенной настойкой растения в патологические десенные карманы, снимали явления воспаления, уменьшали или прекращали выделения из десенных карманов, кровоточивость десен, способствовали уплотнению десенной ткани, что обусловлено присутствием в цветках ноготков большого количества каротиноидов, флавоноидов, обладающих капилляроукрепляющей активностью. Наиболее стойкий терапевтический эффект наблюдался при комплексном лечении (витаминотерапия, физиотерапия).

Также отмечено положительное действие препаратов календулы (ноготков) при сердечно-сосудистых заболеваниях, сопровождающихся сердцебиением, одышкой, отеками. Растение, усиливая сердечную деятельность, приводит к уменьшению или исчезновению отеков.

Настойка ноготков оказывает гипотензивные и успокаивающие свойства. С этой целью проводились научные исследования в Институте терапии Российской Академии медицинских наук. Под наблюдением было 38 больных гипертонической болезнью, принимавших ноготки свыше трех недель. Во время лечения все больные выполняли свою обычную работу. Настойку ноготков принимали 3 раза в день. У 18 человек, страдавших гипертонической болезнью II стадии, отмечено исчезновение головных болей, улучшение сна и повышение работоспособности, у 5 из 18 человек наблюдалось понижение артериального давления. Также у больных гипертонической болезнью I стадии улучшалось общее самочувствие, уменьшались или исчезали головные боли, улучшался сон. Побочного действия не отмечалось, однако настойку ноготков необходимо применять длительно.

Использование календулы (ноготков) при заболеваниях желудочно-кишечного тракта связано с их высокой терапевтической эффективностью при воспалительно-дистрофических процессах слизистых оболочек и паренхиматозной ткани внутренних органов. Хорошие результаты наблюдаются при одновременном применении календулы (ноготков) с ромашкой и тысячелистником.

Большое содержание в цветках ноготков каротиноидов, флавоноидов, аскорбиновой кислоты и органических кислот обусловливает повышение метаболической функции печени, при котором улучшается состав желчи, понижается концентрация в ней билирубина и холестерина, повышается секреторная и выделительная функции. А в сочетании ноготков с препаратами ромашки улучшается желчевыделительная функция, что способствует устранению застоя желчи в желчном пузыре.

Применение в народной медицине

В народной медицине настой ноготков используется при заболеваниях печени и желчного пузыря, селезенки, желудка, при камнях в мочевом пузыре. На Полесье растение считали хорошим средством от бессонницы. С этой целью цветы добавляли в купели детей, клали под голову, давали пить с молоком. Из ноготков на сметане готовили мазь для обесцвечивания веснушек. На Гуцульщине напар цветков давали вместо чая золотушным детям, купали новорожденных, мыли голову при болях. В Закарпатье настойку цветков успешно применяли для лечения ран и язв.

Во Франции соцветия календулы широко применяют для промывания ран при укусах пчел и ос, при авитаминозах и истерии.

В народной медицине многих стран ноготками лечат воспалительные и гнойные процессы в ротовой полости и глотке, включая пародонтоз, заболевания кожи (экзему, фурункулез), маститы, обесцвечивают пигментные пятна. Календулу (ноготки) рекомендуют также при неврастении и патологическом климаксе. В народной медицине Белоруссии отвар соцветий ноготков употребляют при заболеваниях печени, диатезах у детей, при маточных кровотечениях, для профилактики выкидыша после травмы. В литовской народной медицине растение известно как противораковое средство.

Историческая справка

Как лекарственное средство ноготки использовались еще древними греками для лечения плохо заживающих ран, фурункулов, злокачественных опухолей и др. Во времена Римской империи бедные люди и мошенники выдавали лепестки растения за дорогой шафран. Диоскорид писал, что «если беременная женщина введет календулу в виде свечек, то сразу выбросит плод».

О пользе ноготков писал и Авиценна (979–1037). Он отмечал, цветки растения помогают при воспалении седалищного нерва, от всех ядов, особенно при укусах ядовитых животных. Свежий сок растения он предлагал женщинам при задержке менструаций и при отравлении лекарством.

Лечебная польза ноготков была известна и ценилась в XІІ–XIV вв. Средневековый армянский врач XV в. Амирдовлат Амансиаци в книге «Ненужное для невежд» (1478–1482) рекомендовал применять мазь ноготков при «горячих отеках», сок - пить натощак при отравлении ядами, припарки из измельченного корня растения на спину - для увеличения половой возбудимости, сок из корня - для успокоения зубной боли и при насморке.

Растолченные листья и цветки растения применяли наружно для выведения бородавок и мозолей, а внутрь - для лечения рака, особенно молочной железы и женских половых органов. Немецкая целительница Святая Гильдегарда (1098–1170) рекомендовала употреблять ноготки при отравлениях, мигрени, для лечения парши и других заболеваний кожи. Средневековые алхимики и знахари считали, что календула (ноготки) содержат силу солнца, ее собирали в полдень в солнечный день, складывали в банки, выставляли на солнце и через несколько дней изготавливали сок для лечения ран.

Г. Нандельштедт в 1819 году защитил диссертацию об исследовании лечебных свойств ноготков. В своей работе он использовал старинные травники и лечебники и рекомендовал применять растолченные листья и цветки календулы местно при бородавках и мозолях, а внутрь - при раке молочной железы и женских половых органов.

Во французской Фармакопее 1840 года описано 5 препаратов травы, листьев и семян ноготков рекомендованных для лечения некоторых разновидностей рака.

Русский врач-фармаколог академик А. П. Нелюбин в 1852 году в своих трудах писал, что календула (ноготки) - это «целебное средство, одаренное особенною врачебною силой». Он отмечал, что в народной медицине растение использовали «при хронической рвоте, болях в предсердии, при скирозных уплотнениях, раке кожи; венерических, лишайных и чесоточных язвах».

В настоящее время препараты ноготков введены в государственные фармакопеи многих стран мира.

Литература

1. Государственная Фармакопея СССР. Одиннадцатое издание. Выпуск 1 (1987), выпуск 2 (1990).

2. Государственный Реестр лекарственных средств. Москва 2004.

3. Лекарственные растения государственной фармакопеи. Фармакогнозия. (Под ред. И.А. Самылиной, В.А. Северцева). - М., «АМНИ», 1999.

4. Машковский М.Д. «Лекарственные средства». В 2 т. - М., ООО «Издательство Новая Волна», 2000.

5. «Фитотерапия с основами клинической фармакологии» под ред. В.Г. Кукеса. - М.:Медицина, 1999.

6. П.С. Чиков. «Лекарственные растения» М.: Медицина, 2002.

7. Соколов С.Я., Замотаев И.П. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия). - М.: VITA, 1993.

8. Маннфрид Палов. «Энциклопедия лекарственных растений». Под ред. канд. биол. наук И.А. Губанова. Москва, «Мир», 1998.

9. Турова А.Д. «Лекарственные растения СССР и их применение». Москва. «Медицина». 1974.

10. Лесиовская Е.Е., Пастушенков Л.В. «Фармакотерапия с основами фитотерапии.» Учебное пособие. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003.

11. Лекарственные растения: Справочное пособие. / Н.И. Гринкевич, И.А. Баландина, В.А. Ермакова и др.; Под ред. Н.И. Гринкевич - М.: Высшая школа, 1991. - 398 с.

12. Растения для нас. Справочное пособие / Под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. - Изд-во «Учебная книга», 1996. - 654 с.

13. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия: Учеб. пособие / Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. - СПб.: СпецЛит, 2004. - 765 с.

14. Носов А. М. Лекарственные растения. - М.: ЭКСМО-Пресс, 2000. - 350 с.

15. Здоровая кожа и растительные средства/ Авт.-сост.: И. Пустырский, В. Прохоров. - М. Махаон; Мн.: Книжный Дом, 200. - 192 с.

16. Специи и пряности. /Текст Я. Кибала - Издательство Артия, Прага, 1986. - 224 с.

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фитохимическое исследование по стандартизации и созданию лекарственных средств на основе календулы лекарственной

На правах рукописи

ШАРОВА ОЛЬГА ВЛАДИМИРОВНА

ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПО СТАВДАРТИЗАЦИИ И СОЗДАНИЮ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ КАЛЕНДУЛЫ ЛЕКАРСТВЕННОЙ

15.00.02 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Самара-2007

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

Доктор фармацевтических наук, профессор Куркин Владимир Александрович Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Шатапаев Иван Федорович доктор фармацевтических наук, профессор Дмитрук Степан Евгеньевич

Ведущее учреждение ~ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

На заседании диссертационного совета К 208 085 03

При ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава»

(443 079, г Самара, проспект К Маркса, 165 Б)

С диссертационной работой можно ознакомиться В библиотеке ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава» (Самара, ул Арцыбушевская, 171).

Ученый секретарь

Диссертационного совета

Защита состоится «_

Кандидат фармацевтических наук

EJB. Авдеева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы Препараты календулы лекарственной, или ноготков лекарственных (Calendula officinalis L.) успешно используются в аллопатической и гомеопатической медицине как средства обладающие ранозаживляющими, противовоспалительными, регенерирующими, желчегонными и отхаркивающими свойствами Календула широко культивируется в Российской Федерации, а Самарская область является регионом, где сосредоточена самая крупная сырьевая база календулы лекарственной (СГПУ «Сергиевский», ЗАО «Самаралектравы» и ООО «Кентавр»)

В настоящее время цветки календулы лекарственной используются в отечественной медицинской практике в виде настойки (МО на 70% этиловом спирте), экстракта жидкого (1:2 на 40% этиловом спирте), масляного экстракта, мази, суппозиторий, входят в состав комплексных препаратов. Ротокан, Витаон, Алором, Венен гель, сбор желчегонный №3, сбор грудной №4 и др.

Широкий спектр фармакологического действия цветков календулы обусловлен содержанием различных классов биологически активных соединений (БАС). К ведущей группе БАС относятся витамины, а именно" каротиноиды Установлено, что содержание каротиноидов в сырье коррелирует со степенью махровости соцветий, а также зависит от способа сушки и условий хранения, однако анализ цветков календулы на содержание каротиноидов в НД не предусмотрен. Вторая группа

биологически активных соединений представлена флавоноидами, однако данные по компонентному составу являются противоречивыми

Фотохимические аспекты показателей качества в случае сырья и препаратов данного растения, также нуждаются в дальнейшем изучении, поскольку в Фармакопейной статье (ФС) 5 ГФ СССР XI издания на цветки календулы лекарственной отсутствуют разделы «Качественные реакции» и «Количественное определение», а содержание действующих веществ оценивается лишь косвенно по показателю «экстрактивных веществ, извлекаемых 70% этиловым спиртом, «не менее 35%»

Решение вопросов стандартизации новых лекарственных средств (ЛС) связано с разработкой объективных и унифицированных методов анализа сырья и препаратов (Арзамасцев А П. и др, 2000; Самылина И.А. и др, 1994)

Актуальна также задача по оптимизации состава и технологии препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий На наш взгляд, повышение в лекарственной форме уровня содержания действующих веществ приведет к усилению антимикробной и противовоспалительной активности

Цель и задачи исследования. Проведение изучения химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области, а также разработка унифицированных методик стандартизации сырья и препаратов на основе данного растения

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи.

1 Изучение химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области

2 Разработка новых подходов к стандартизации сырья и препаратов календулы лекарственной, с учетом принципа унификации методик в

ряду лекарственное растительное сырье - субстанция - лекарственная форма.

3 Разработка методик качественного анализа цветков календулы лекарственной

4. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в цветках календулы лекарственной

5 Разработка методики количественного определения суммы каротиноидов в цветках календулы лекарственной

6 Разработка методик качественного и количественного анализа препаратов «Календулы настойка», «Календулы экстракт жидкий».

7 Оптимизация состава и технологии получения лекарственных препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий»

8 Разработка и изучение числовых показателей препаратов. «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий».

9 Разработка и оформление нормативной документации (НД) на сырье «Ноготков цветки», а также препараты «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий»

Научная новизна. В результате изучения химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области, выделены и идентифицированы 7 индивидуальных соединений, среди которых доминирующее флавоноидное вещество (нарциссин) выделено впервые в РФ из данного растения и идентифицировано с использованием УФ-, "Н-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии и различных химических превращений (кислотный и ферментативный гидролиз)

Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов календулы лекарственной по каротиноидам (ведущая группа БАС) и флавоноидам

Научно обоснована целесообразность оптимизации состава и технологии получения лекарственных средств «Календулы экстракт жидкий» и «Календулы настойка», обладающих более высокой противомикробной активностью

Практическая значимость:

1 Разработаны методики качественного и количественного анализа цветков календулы лекарственной в проект ФС «Ноготков цветки» предложено ввести новые разделы «Качественные реакции» и «Количественное определение» и числовой показатель «Содержание суммы флавоноидов не менее 1,0%»

2 Разработаны методики качественного и количественного анализа препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» с использованием ТСХ-анализа и спекгрофотометрии.

3 Определены числовые показатели препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» содержание суммы флавоноидов, сухой остаток, концентрация спирта, экстрактивные вещества

4 Обоснована целесообразность применения разработанных препаратов цветков календулы лекарственной «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» в медицинской практике в качестве средств обладающих противомикробными свойствами.

5 Оформлены и направлены в Фармакопейный государственный комитет Министерства здравоохранения и социального развития РФ Изменения №1 к ФС 5 и проект ФС «Ноготков цветки» для включения в Российскую Государственную Фармакопею ХП издания

6 Разработаны проекты ФС на препараты «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий», для которых оптимизированы состав и технология получения 7. Результаты исследований используются в научных изысканиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета (акты внедрения от №1 и №2 от 4.09.2007 г.).

1. Результаты изучения химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области

2 Данные результатов исследований по разработке методов стандартизации сырья и препаратов календулы лекарственной.

3 Методики качественного и количественного анализа лекарственного растительного сырья (ЛРС) «Ноготков цветки» и препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» с использованием ГСО рутина

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (№ Государственной регистрации 01200105332) и Республиканских программ

1 «Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений в рыночных условиях» по теме-«Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277).

2 «Разработка методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды и флавоноиды» (№ Государственной регистрации 01990007536).

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на П Всероссийском съезде фармацевтических работников (Сочи, 2005 г.), на X и XI Всероссийском конгрессе "Экология и здоровье человека" (Самара, 2005; 2006 гг); на Межвузовской конференции «Аспирантские чтения» (Самара, 2005, 2006 гг), на конференции, посвященной 25-летию фармацевтического факультета БГМУ (Уфа, 2006 г), на 62-й Межрегиональной конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2007 г), на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора ЛН Березнеговской «Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения» (Томск, 2006 г.); на V международной конференции «Медико-социальная экология личности состояние и перспективы» (Минск, 2007 г), на ХП Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2007 г), на Ш Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007 г), на XIV Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1620 апреля 2007 г)

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 150 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц, 23 рисунка Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4-х глав, отражающих результаты собственных

экспериментальных исследований и их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 198 источника, из которых 60 на иностранных языках

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, отмечена новизна и практическая значимость полученных результатов, а также изложены положения, выносимые на защиту.

Глава 1 содержит аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы по современному состоянию исследований календулы лекарственной, в котором обобщены и систематизированы сведения по изучению химического состава растения, фармакологической активности, применению в медицинской практике

В главе 2 представлены характеристика объектов и методов исследования Приведены методики химического, физического и физико-химического изучения лекарственного сырья, индивидуальных веществ и препаратов, а также методы контроля качества лекарственных форм на основе цветков календулы лекарственной

В главах 3-6 экспериментальной части приводятся результаты собственных исследований по изучению химического состава цветков календулы лекарственной, совершенствованию методов стандартизации данного сырья и препаратов на его основе, оптимизации состава и технологии получения, оценке их качества и обоснованию целесообразности внедрения в медицинскую практику в качестве антимикробных и противовоспалительных лекарственных средств

В приложение вынесены материалы по разработке нормативной документации и акты внедрения результатов исследований

1. Микроскопический анализ соцветий календулы лекарственной

Анатомические исследования соцветий календулы лекарственной сорта «Кальта» проводили с использованием микроскопа «Биолам» с увеличением х184,8, х924, х1344

Микроскопический анализ цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области показал, что диагностическое значение для данного вида сырья имеют- наличие хромопластов в клетках эпидермиса, форма клеток эпидермиса, строение, вид и расположение волосков трубчатых и язычковых цветков, а также листочков обертки Немалое диагностическое значение играет и пыльца календулы лекарственной Результаты проведенного исследования подтверждаются соответствующими микрофотографиями.

2. Изучение химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области

В результате изучения химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области, выделены 7 индивидуальных веществ относящихся к фенольным соединениям (1-4), каротиноидам (5), сапонинам (6) и стеринам (7) (табл. 1)

Препаративное разделение веществ осуществляли методом адсорбционной колоночной хроматографии Для элюирования использовали смеси растворителей, а именно: хлороформ-спирт в различных соотношениях. Эффективное разделение и очистка веществ достигалась чередованием сорбентов (силикагель, полиамвд) и соответствующих систем растворителей. Кристаллизацию и перекристаллизацию веществ осуществляли с использованием гексана,

хлороформа, этилового спирта и воды. Отсутствие примесей в полученных соединениях контролировали методом ТСХ в нескольких системах с использованием различных способов детекции

Для установления структуры выделенных веществ использовали данные УФ-, "Н-ЯМР- и масс-спектров, а также результаты химических превращений ЯМР- и УФ-спектры выделенного диагностического флавоноида цветков календулы - нарциссина представлены на рисунках 1 и 2 соответственно

"Н-ЯМР-спектр нарциссина в смеси дейтероацетона и D20 (200 МГц) (Gemmmi 200) 8 (м д) 7,97 (д, 2 Гц, Н"-2), 7,66 (дд, 2 и 8,5 Гц, Н"-6), 6,96 (д, 2 Гц, Н"-5), 6,50 (д, 2 Гц, Н"-8), 6,24 (д, 2 Гц, Н-6), 5,23 (д, 7 Гц, Ни-1 глюкопиранозы), 4,50 (д, 2 Гц, НИ1-1 рамнопиранозы), 3,95 (с, ЗН, СНэО), 3,2-3,8 (10 Н Сахаров), 1,04 (д, 6 Гц, СН3 рамнозы) (рис 1,2) Нарциссин гидролизуется ферментом рамнодиастазой, что позволяет сделать вывод о наличии в данном гликозиде биозы рутинозы. При кислотном гидролизе расщепляется на глюкозу, рамнозу и агликон, идентифицированный как 3,5,7,4"-тетрагидрокси-3"-метоксифлавон (изорамнетин) УФ-спектры с диагностическими реагентами свидетельствуют о гликозилировании 3-ОН-группы изорамнетина

Следовательно, выделенное соединение является З-О-рутинозидом изорамнетина (нарциссин).

Соединения выделенные, в ходе проведения фитохимического исследования цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области, представлены в таблице 1

Установлено, что нарциссин является доминирующим и диагностическим флавоноидом впервые и выделенным в РФ из цветков календулы лекарственной.

Pue. 1. JIMP-cnerrp 3-0-p>thho3h4 n3opaMHeTHHa b ^ettTCpoanerOHe (+D20).

PHC. 2. y-cneKTp HapnwccHna

Таблица 1

Физико-химические константы соединений, выделенных из цветков календулы лекарственной

№ Название, химическая формула Состав У? Т.пл °С С(ЕЮН), нм

1. Нарциссин рсч, TXJP™ ^Ч^у-Шит С28Н32О16 316 173175° 257,268пл, 367 нм

2. Изокверцитрин он о C21H20OU 302 227229° 256,267пл, 370 нм

3 Кофейная кислота С9Н8О4 180 218221° 235,242, 326

4 Хлорогеновая кислота он CieHjeOp 203205° 243,300 пл, 330

5 Р-каротин НзС- ХЦ, ?"» Нз^Х^

6. Олеаноловая кислота СзоНдаОз т пл. 304307°

7. Р-ситостерин С29Н50 О т пл 135137°

3. Совершенствование методов стандартизации сырья «Ноготков цветки»

Согласно современным требованиям (НД) на ЛРС, фотохимический анализ включает задачи качественного и количественного анализа ЛРС по содержанию ведущих групп БАС, обеспечивающих фармакологическую активность.

Так, в нормативной документации на сырье «Ноготков цветки» отсутствуют разделы «Качественные реакции» и «Количественное определение» и, следовательно, для целей идентификации сырья не используются химические диагностические признаки В этом отношении особый интерес представляет тонкослойная хроматография, которая в последнее время все более широко используется в методиках качественного анализа

Учитывая высокое содержание флавоноидов в цветках календулы лекарственной, их несомненную значимость в проявлении биологической активности данного сырья, представляется целесообразным проведение исследований в плане обоснования возможности стандартизации данного ЛРС по содержанию флавоноидов

Необходимость во внесении изменений в ФС «Ноготков цветки» (ст. 5 ГФ XI издания) объясняется в данном случае отсутствием разделов: «Качественные реакции» и «Количественное определение».

Кроме того, в литературе описаны методики определения подлинности сырья «Ноготков цветки» путем обнаружения рутина, однако, по результатам проведенных нами исследований данное соединение в соцветиях календулы лекарственной не обнаружено, что говорит о нецелесообразности данного подхода

В этой связи, нами предложены новые подходы к стандартизации, заключающиеся в обнаружении доминирующего и диагностического флавоноида нарциссина в присутствии ГСО рутина (качественные реакции), а также определение суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии

Рис. 3. ТСХ-анализ извлечений цветков календулы лекарственной

(«Силуфол УФ -254», система растворителей: хлороформ - метиловый спирт -вода (26 14:3). Обозначения

1 Государственный стандартный образец рутина

3. Рабочий стандартный образец Р-каротина

4. Извлечение на 40% этиловом спирте из цветков календулы лекарственной

5 Извлечение на 70% этиловом спирте из цветков календулы лекарственной.

3.1. Качественный анализ цветков календулы лекарственной

С целью определения подлинности сырья «Ноготков цветки» использовали ТСХ-анализ (рис 3), основанный на обнаружении и идентификации доминирующего флавоноида (нарциссин), и качественные реакции

В ходе разработки методики были проведены исследования по выбору оптимальных условий хроматографирования, позволяющие эффективно разделить основные компоненты сырья и однозначно идентифицировать доминирующее БАС-нарциссин.

В результате проведенных опытов с различными хроматографическими системами (хлороформ-этанол, хлороформ-метанол, хлороформ-метанол-вода в различных соотношениях) предпочтение было отдано системе растворителей хлороформ-метанол-вода (2614.3), обеспечивающей наиболее четкое разделение флавоноидов, в том числе и доминирующего компонента - З-О-рутинозид изорамнетина При просмотре хроматограммы в УФ-свете при длине 254 нм З-О-рутинозид изорамнетина обнаруживается в виде доминирующего пятна с ярко-фиолетовой флуоресценцией (Ь^ около 0,5) (рис 3).

На наш взгляд, в данной методике целесообразно использовать ГСО рутина, по физико-химическим свойствам близкий к нарцисеину, так как расчет величины ^ позволит повысить объективность методики для анализируемого вещества

Учитывая разнообразие БАС цветков календулы, целесообразно также определять в сырье наличие (3-каротина и тритерпеновых сапонинов

Для качественного анализа предлагается использовать также данные УФ-спектра водно-спиртового извлечения цветков календулы лекарственной имеющий полосы поглощения с максимумами при 256±2 нм (флавоноиды) и «плечо» в области около 330-350 нм (флавоноиды+гидроксикоричные кислоты) (рис 4).

Исходя из полученных данных можно с уверенностью сказать, что выделенный впервые в РФ, из цветков календулы лекарственной диагностический флавоноид (нарциссин), достаточно объективно характеризует данное сырье.

Рис. 4. УФ-спектры растворов извлечений из цветков календулы

лекарственной.

Обозначения:

1 - раствор извлечения (1:30) из цветков календулы

лекарственной;

2 - раствор извлечения (1:30) из цветков календулы

лекарственной с добавлением алюминия хлорида;

3 - раствор извлечения (1:30) из цветков календулы

лекарственной с добавлением алюминия хлорида (дифференциальный спектр)

ДпиниН0ЛН

3.2. Количественный анализ цветков календулы лекарственной

В основу предложенной нами методики количественного анализа БАС цветков календулы лекарственной предложено дифференциальное спектрофотометрическое определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин

С целью разработки методики количественного определения суммы флавоноидов нами определены оптимальные условия экстракции цветков календулы лекарственной экстрагент 70% этанол; соотношение сырье-экстрагент - 1-30, время экстракции - извлечение на водяной бане при температуре 85-90 °С в течение 60 мин

При разработке методики количественного определения суммы флавоноидов использовали реакцию комплексообразования с раствором алюминия хлорида для исключения вклада в значение оптической плотности других групп соединений В этом случае наблюдается батохромный сдвиг длинноволновой полосы флавоноидов, который обнаруживается в УФ-спектре в виде максимума поглощения при длине волны 408 нм. Это находит подтверждение в условиях дифференциальной спектрофотометрии. максимум поглощения при 412 нм (рис 4)

Изучение УФ-спектров ГСО рутина показало, что раствор данного стандарта в присутствии алюминия хлорида имеет тот же максимум поглощения (412 нм). Следовательно, рутин может быть использован в методике анализа в качестве ГСО

Метрологические характеристики методики количественного определения флавоноидов в сырье «Ноготков цветки», рассчитаны из результатов анализа одного образца данного сырья в 11 независимых измерениях (табл 2)

\1cipo 101 нче«.кии хараккриники мсшшьн 1м>.аш2

ко.жчссшенною »¡¡ре имения пммы ф мнинои юн н циспчач ка.юп 1\.1Ы.к-каровс-ннои

/ X 5 Р, % ЦР£ АХ Е, %

1(1 IV) МИНУ 2 2? 0,1)41 \ Н)

Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения суммы флавоноидов в цветках календулы лекарственной с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,40%. Опыты с добавками ГСО рутина в извлечение из цветков календулы свидетельствуют об отсутствии систематической ошибки

Следует отметить, что цельное и измельченное сырье, на котором проводилась отработка по показателю качества «содержание суммы флавоноидов», соответствовало требованиям ФС 5 ГФ XI издания по внешнему виду, микроскопическим и числовым показателям

4. Совершенствование методов стандартизации препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий»

При разработке подходов к решению проблем стандартизации препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» мы придерживались принципа унификации методик анализа в ряду лекарственное растительное сырье-субстанция-лекарственная форма (И.А. Самылина, 1994,1995 г).

Для качественного анализа препаратов данного растения, как и случае сырья, предложен метод ТСХ-анализа с использованием ГСО рутина, а также идентификация по параметрам УФ-спектра.

Рис. 5. ТСХ-анализ препаратов календулы лекарственвой

(«Силуфол УФ -254», система растворителей хлороформ - метиловый спирт пода. (26-14 3) Обозначения:

1 Государственный стандартный образец рутина.

2 Рабочий стандартный образец нарциссина

3. Рабочий стандартный образец (3-каротина

4. Настойка (1 5) на 70% этиловом спирте го цветков календулы лекарственной

5. Экстракт (1 2) на 70% этиловом спирте из цветков календулы лекарственной

При просмотре хроматограммы в УФ-свете при длине волны 254 нм обнаруживается доминирующее пятно с фиолетовой флуоресценцией-величина около 0,5 (нарциссин) (рис 5) На хроматограмме извлечения возможно обнаружение также других веществ - изокверцитрина (пятно с фиолетовой флуоресценцией), а также р-каротин с величиной Ь^ около 0,9 (пятно желтого цвета) Допускается также наличие других пятен с величиной около 0,8 (кофейная кислота) и 0,2 (хлорогеновая кислота) Также для качественного анализа предлагается использовать данные УФ-спектра водно-спиртового извлечения цветков календулы лекарственной с характерным максимумом при 256±2 нм (флавоноиды) и «плечом» в области 330 -350 нм (флавоноиды+гидкроксикоричные кислоты)

В основу количественного определения суммы флавоноидов в настойке и экстракте календулы лекарственной, как в случае сырья положен метод дифференциальной спектрофотометрии Определение

суммы флавоноидов осуществляют в пересчете на рутин, как это предусмотрено и в проекте ФС 42- (взамен ФС 5 ГФ СССР XI издания)

УФ-спектр спиртовых растворов препаратов, в частности экстракта (рис. 6) имеет характерный максимум при Хтоах=256±2 нм (флавоноиды) и «плечом» в области 330-350 нм (флавоноиды+гидроксикоричные кислоты). Поскольку, ранее было обосновано что, оценку качества сырья целесообразно проводить по содержанию флавоноидов, аналитическая длина волны составляет - 412 нм. В данной области спектра спиртовые растворы препаратов и флавоноиды (нарциссин) имеют прямопропорциональную зависимость оптической плотности от концентрации Данное обстоятельство позволяет использовать спектрофотометрию для количественного определения флавоноидов в пересчета на рутин

Метрологические характеристики методики количественного анализа суммы флавоноидов в препарате «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» представлены в табл 4 ,5

Mci po.ioi ii"ii"iкко \/<; 4

KO.III"Kllltl-IfllOIl) Ulipciv.li.llllll оччы ф.ышикш l»lt u

IIUCMIHKI KM.II II 14.11.1 .U"K.ipcillt IIIIOII

_ __ _ __ __ _ _____

10 0,3 J 0,(X)51 95 2.23 0,01147 3,70

Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет 3,70% Опыты с добавками ГСО рутина в препарат и в раствор А показали, что относительная ошибка находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки методики

М(.1|10.1<)1ИЧССкИС \jpdk-UpifC1liKI1 М(1Л1ИКИ ГчШЧЧ I

КО 1ИМСС1ВСПШН О (Игр*. К И"ИИИ 1>ММ1.1 ф.ЫН(1ИОИ ШП II

жирдк-ю кален 1>.1м ¡екарсшеннои

7 т Т7РЪ лх I

10 очл (I ()| ч«. :.■« оогыч

Ошибка единичного определения с доверительной вероятностью 95% составляет 4,65% (табл. 5); ошибка анализа находится в пределах ошибки единичного определения, что свидетельствует об отсутствии систематической ошибки методики (опыты с добавками).

С учетом результатов проведенных исследований возникла необходимость в пересмотре некоторых разделов имеющейся НД на цветки календулы лекарственной и препараты «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий».

5. Обоснование использования разработанных препаратов в медицинской практике

Цветки календулы лекарственной являются перспективным источником для получения лекарственных средств, обладающих, антимикробных, противовоспалительных, ускоряющих регенерацию лекарственных средств Большие ресурсы и доступность сырья, обширные сведения народной медицины, широкий спектр терапевтического действия делают календулу перспективным объектом исследования.

Достаточного широкий спектр терапевтического действия препаратов календулы лекарственной объясняется высоким содержание действующих веществ (флавоноиды, каротиноиды, тритерпеновые сапонины).

С использованием разработанных методик анализа нами оптимизированы состав и технология получения лекарственных средств «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий».

В усовершенствованных лекарственных средствах («Календулы настойка» в соотношении 1 5 вместо соотношения 1 10 и «Календулы экстракт жидкий» на 70% этиловом спирте, вместо 40% этилового спирта) обосновано более высокое содержание биологически активных соединений - каротиноидов и флавоноидов (соответственно в 1,2 и 1,5 раза) Разработанные препараты «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» превосходят в 2 раза по антимикробной активности образцы промышленных аналогов.

1 В результате изучения химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области, выделены 7 индивидуальных веществ, относящихся к фенольным соединениям (14), каротиноидам (5), сапонинам (6) и стерлиам (7).

2 Выделенные вещества идентифицированы с помощью УФ-, "Н-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии, а также различных химических превращений как нарциссин, изокверцитин, кофейная кислота, хлорогеновая кислота, Р-каротин, олеаноловая кислота и р-ситостерин.

3 Установлено, что доминирующий диагностический флавоноид цветков календулы лекарственной нарциссин (З-О-рутшюзид изорамнетина) выделен впервые в РФ из сырья данного растения

4 Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов цветков календулы лекарственной по содержанию суммы флавоноидов (количественное определение) и по содержанию доминирующего флавоноида нарциссина (качественные реакции)

5 Разработаны методики качественного ТСХ-анализа цветков календулы лекарственной, основанные на обнаружении нарциссина, а также на определении параметров УФ-спектра

6 Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на ГСО рутина с использованием дифференциальной спектрофотометрии. Ошибка единичного

определения содержания суммы флавоноидов с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,40%

8 Обосновано включение в проект ФС «Ноготков цветки» дополнения к разделу «Качественные реакции» и введение нового раздела «Количественное определение» с регламентацией числового показателя «Сумма флавоноидов в пересчете на рутин не менее 1%.

9. Осуществлена оптимизация состава и способа получения лекарственных средств «Календулы настойка» (Г5) и «Календулы экстракт жидкий» (1:2) с использованием в обоих случаях в качестве экстрагента 70% этилового спирта

Ю.Разработаны методики качественного и количественного анализа препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» с использованием ТСХ и дифференциальной спектрофотометрии Ошибка единичного определения содержания суммы флавоноидов в настойке и экстракте с помощью разработанных методик с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,65% и ±4,70% соответственно

11. Определены числовые показатели препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» содержание суммы флавоноидов, сухой остаток, содержание спирта, В качестве нижнего предела содержания суммы флавоновдов, в пересчете на рутин, в настойке и экстракте рекомендованы показатели 0,2% и 0,4%, соответственно.

12.На основании экспериментальных данных, полученных в ходе химического изучения и анализа различных образцов цветков календулы лекарственной (Calendula officinalis L.), оформлены Изменения №1 к ст. 5 (ГФ XI) и проект ФС «Ноготков цветки» для включения в Российскую Государственную Фармакопею XII издания

13.Разработаны проекты ФСП «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий», лекарственные средства на основе цветков календулы, обладающие более выраженной антимикробной активностью по сравнению с соответствующими промышленными аналогами.

1. Шарова, О В Хроматографическое исследование препаратов на основе цветков календулы лекарственной / О В Шарова // Аспирантский вестник Поволжья Тез. докл. №1, 2005 г. - Самара, 2005.- С. 109.

2. Браславский, В.Б. Перспективы использования антибактериальных растительных средств в медицинской практике. / В Б Браславский, О Е. Правдивцева, А.В. Куркина, В В Стеняева, А И Бонцевич, О В Шарова, Е С Артамонова, В М Рыжов // Экология и здоровье человека Труды X Всероссийского конгресса, Самара 11-13 октября 2005 г - Самара, 2005. - С 42-43

3. Куркин, В.А Современные аспекты стандартизации лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов, содержащих флавоноиды / В А. Куркин, Г Г Запесочная, В Б. Браславский, Е В Авдеева, О Е Правдивцева, А В Супильникова, В В Стеняева, М.В Егоров, А.И. Бонцевич, О В Шарова / П Всероссийский съезд фармацевтических работников. Материалы съезда, Сочи, 5-7 июня 2005 г. - Сочи, 2005 - С 95-96.

4. Шарова О.В. Фитохимическое исследование сырья и препаратов на основе цветков календулы лекарственной / О.В Шарова, В А Куркин // Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н Березнеговской, Томск, 11-12 сентября 2006. - Томск, 2006 -С 370-372.

5. Шарова, О В Фармакогностическое исследование цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области / О В Шарова // Медицинский вестник Башкортостана Специальный выпуск посвящен 25-летию фарм. ф-та БГМУ. - 2006 -№ 1 - С 181-184

6. Шарова О.В Проблемы создания и стандартизации сырья и препаратов календулы лекарственной / О В Шарова // Экология и здоровье человека Проблемы выживания человека в техногенной среде современных городов: Труды XI Всероссийского конгресса, Самара, 5-7 декабря 2006 г - Самара, 2006 - С 18-19.

7. Шарова, О В Фитохимическое исследование сырья и препаратов на основе цветков календулы лекарственной / О В Шарова // Аспирантские чтения: Материалы межвуз конф. молодых ученых -Самара, 2006 - 284-287

8. Куркин, В.А. Флавоноиды цветков Calendula officinalis / В.А. Куркин, О.В Шарова Н Химия природ, соединений. - 2007. - № 2 С. 179-180

9. Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб науч. тр. / под ред. Е.Н. Вергейчика, Н Н. Кареевой / Пятигорская ГФА, Санкт-Петербургская ГХФА - Пятигорск, 2007. -С 416-420.

10. Куркин, В.А. Актуальные аспекты стандартизации лекарственного растительного сырья, содержащего флавоноиды / В А. Куркин, Е В. Авдеева, В.Б Браславский, О.Е Правдивцева, А В. Куркина, М В. Егоров, О В Шарова, Е С Артамонова, В.М Рыжов, Ламрини Мохаммед // Человек и лекарство: Тез. докл XIV Рос. нац конгр, Москва, 16-20 апр 2007 г. - М., 2007 - С. 839

11. Шарова, О В Проблемы стандартизации сырья «Ноготков цветки» / О.В Шарова // Молодые ученые в медицине. Тез докл ХП Всероссийской научно-практической конф., Казань, 25-26 апр 2007 -Казань,2007 -С.270-271

12. Шарова, О В Фитохимическое исследование сырья «Ноготков цветки» / О В. Шарова, В.А. Куркин // Медико-социальная экология личности- состояние и перспективы. Материалы V Международной конф, Минск, 6-7 апр. 2007. - Минск, 2007. - С. 345-347

13. Шарова, О.В Современные подходы к стандартизации сырья «Ноготков цветки» / О.В. Шарова // Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья: Материалы Ш Всероссийской конф., книга 2. - Барнаул, 2007. - С 245-249.

14. Шарова, О.В Флавоноиды цветков календулы лекарственной / О.В Шарова, В.А. Куркин // Химия растительного сырья - 2007. №1. С 65-68

Подписано в печать 19 09.2007 Формат 60x84/16. Бумага офсетная Печать оперативная Уел печ л 1,63 Тираж 100 экз Заказ 973

Отпечатано в типографии ООО «ОФОРТ» 443080, г Самара, ул Революционная, 70, литера П Тел. 372-00-56,372-00-57

Глава 1. Современное состояние исследований цветков календулы лекарственной (Обзор литературы).

1.1. Историческая справка.

1.2. Ботаническое описание.

1.3. Ареал, культивирование.

1.4. Химический состав.

1.5. Микроскопия.

1.6. Числовые показатели.

1.7. Промышленное возделывание.

1.8. Заготовка и первичная обработка.

1.9. Применение цветков календулы лекарственной в народной и 36 традиционной медицине.

1.10. Фармакологические свойства цветков календулы 42 лекарственной и препаратов на ее основе.

1.11. Перспективы создания новых препаратов на основе цветков календулы лекарственной.

Выводы к главе 1.

Экспериментальная часть

Глава 2. Объекты и методы исследования.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Метод колоночной хроматографии.

2.2.2. Метод тонкослойной хроматографии.

2.2.3. Метод спектрофотометрии.

2.2.4. "Н-ЯМР-спектроскопия. Масс-спектрометрия.

2.2.5. Методы, использованные для установления строения и идентификации выделенных соединений.

2.2.6. Методы, использованные для получения лекарственных средств и определения числовых показателей.

2.2.7. Исследование анатомического строения соцветий календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области.

Глава 3. Микроскопический анализ соцветий календулы лекарственной.

3.1. Методика приготовления микропрепарата «Цветки календулы лекарственной».

3.2. Приготовление микропрепарата на основе пыльцы календулы лекарственной.

3.3. Анализ строения цветков календулы лекарственной.

Выводы к главе 3.

Глава 4. Изучение химического состава цветков календулы лекарственной.

4.1. Получение суммы биологически активных веществ из сырья «Ноготков цветки» и их хроматографическое разделение.

4.2. Физико-химическая характеристика выделенных соединений и их производных.

Выводы к главе 4.

Глава 5. Совершенствование методов стандартизации сырья

Ноготков цветки».

5.1. Качественный анализ.

5.1.1. Методика качественного анализа цветков календулы лекарственной по содержанию флавоноидов.

5.1.1.1. Ультрафиолетовый спектр.

5.1.1.2. Качественная реакция.

5.1.1.3. Методика ТСХ-анализа цветков календулы лекарственной.

5.2. Количественное определение.

5.2.1. Методика количественного суммы флавоноидов в сырье

Ноготков цветки».

5.3. Методика ТСХ-анализа цветков календулы лекарственной на содержание каротиноидов.

5.4. Методика количественного анализа цветков календулы лекарственной на содержание каротиноидов.

5.5. Обоснование нижнего предела содержания суммы каротиноидов в различных образцах сырья календулы ^ лекарственной.

Выводы к главе 5.

Глава 6. Исследования по разработке и стандартизации новых препаратов на основе цветков календулы лекарственной.

6.1. Качественный анализ препаратов на основе цветков календулы лекарственной.

6.1.1. Методика качественного анализа настойки календулы лекарственной.

6.1.2. Методика качественного анализа жидкого экстракта на основе цветков календулы лекарственной.

6.2. Количественное определение суммы флавоноидов в препаратах на основе цветков календулы лекарственной.

6.2.1. Методика количественного определения суммы флавоноидов в настойке календулы лекарственной.

6.2.2. Методика количественного определения суммы флавоноидов в экстракте календулы лекарственной.

6.3. Оптимизация состава и технологии получения препарата «Календулы настойка».

6.4. Разработка препарата «Календулы экстракт жидкий».

6.5. Обоснование целесообразности использования лекарственных препаратов «Календулы настойка» и

Календулы экстракт жидкий» в медицинской практике.

Выводы по главе 6.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Шарова, Ольга Владимировна, автореферат

Актуальность темы. Препараты календулы лекарственной, или ноготков лекарственных (Calendula officinalis L.) успешно используются в аллопатической и гомеопатической медицине как средства обладающие ранозаживляющими, противовоспалительными, регенерирующими, желчегонными и отхаркивающими свойствами. Календула широко культивируется в Российской Федерации, а Самарская область является регионом, где сосредоточена самая крупная сырьевая база календулы лекарственной (СГПУ «Сергиевский», ЗАО «Самаралектравы» и ООО «Кентавр»).

В настоящее время цветки календулы лекарственной используются в отечественной медицинской практике в виде настойки (1:10 на 70% этиловом спирте), экстракта жидкого (1:2 на 40% этиловом спирте), масляного экстракта, мази, суппозиторий, входят в состав комплексных препаратов: Ротокан, Витаон, Алором, Венен гель, сбор желчегонный №3, сбор грудной №4 и др.

Широкий спектр фармакологического действия цветков календулы обусловлен содержанием различных классов биологически активных соединений (БАС). К ведущей группе БАС относятся витамины, а именно: каротиноиды. Установлено, что содержание каротиноидов в сырье коррелирует со степенью махровости соцветий, а также зависит от способа сушки и условий хранения, однако анализ цветков календулы на содержание каротиноидов в НД не предусмотрен. Вторая группа биологически активных соединений представлена флавоноидами, однако данные по компонентному составу являются противоречивыми.

Фитохимические аспекты показателей качества в случае сырья и препаратов данного растения, также нуждаются в дальнейшем изучении, поскольку в Фармакопейной статье (ФС) 5 ГФ СССР XI издания на цветки календулы лекарственной отсутствуют разделы «Качественные реакции» и

Количественное определение», а содержание действующих веществ оценивается лишь косвенно по показателю «экстрактивных веществ, извлекаемых 70% этиловым спиртом, «не менее 35%».

Решение вопросов стандартизации новых лекарственных средств (ЛС) связано с разработкой объективных и унифицированных методов анализа сырья и препаратов (Арзамасцев А.П. и др., 2000; Самылина И.А. и др., 1994).

Актуальна также задача по оптимизации состава и технологии препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий. На наш взгляд, повышение в лекарственной форме уровня содержания действующих веществ приведет к усилению антимикробной и противовоспалительной активности.

Цель и задачи исследования. Проведение изучения химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области, а также разработка унифицированных методик стандартизации сырья и препаратов на основе данного растения.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Изучение химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области.

2. Разработка новых подходов к стандартизации сырья и препаратов календулы лекарственной, с учетом принципа унификации методик в ряду лекарственное растительное сырье - субстанция - лекарственная форма.

3. Проведение анализа анатомо-гистологических признаков соцветий календулы для уточнения диагностических особенностей данного ЛРС.

4. Разработка методик качественного анализа цветков календулы лекарственной.

5. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в цветках календулы лекарственной.

6. Разработка методики количественного определения суммы каротиноидов в цветках календулы лекарственной.

7. Разработка методик качественного и количественного анализа препаратов «Календулы настойка», «Календулы экстракт жидкий».

8. Оптимизация состава и технологии получения лекарственных препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий».

9. Разработка и изучение числовых показателей препаратов: «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий».

10.Разработка и оформление нормативной документации (НД) на сырье «Ноготков цветки», а также препараты «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий».

Научная новизна. В результате изучения химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области, выделены и идентифицированы 7 индивидуальных соединений, среди которых доминирующее флавоноидное вещество (нарциссин) выделено впервые в РФ из данного растения и идентифицировано с использованием УФ-, "Н-ЯМР-спектроскопии, масс-спектрометрии и различных химических превращений (кислотный и ферментативный гидролиз).

Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов календулы лекарственной по каротиноидам (ведущая группа БАС) и флавоноидам.

Разработаны подходы к стандартизации, заключающиеся в обнаружении диагностического доминирующего флавоноида - нарциссина с использованием ТСХ-анализа, ГСО рутина и УФ-спектроскопии.

Научно обоснована целесообразность оптимизации состава и технологии получения лекарственных средств «Календулы экстракт жидкий» и «Календулы настойка», обладающих более высокой противомикробной активностью.

Практическая значимость:

1. Разработаны методики качественного и количественного анализа цветков календулы лекарственной: в проект ФС «Ноготков цветки» предложено ввести новые разделы «Качественные реакции» и «Количественное определение» и числовой показатель «Содержание суммы флавоноидов не менее 1,0%».

2. Разработаны методики качественного и количественного анализа препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» с использованием ТСХ-анализа и спектрофотометрии.

3. Определены числовые показатели препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий»: содержание суммы флавоноидов, сухой остаток, концентрация спирта, экстрактивные вещества.

4. Обоснована целесообразность применения разработанных препаратов цветков календулы лекарственной «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» в медицинской практике в качестве средств обладающих противомикробными свойствами.

5. Оформлены и направлены в Фармакопейный государственный комитет Министерства здравоохранения и социального развития РФ Изменения №1 к ФС 5 (письмо № 123 от 27.01.05г.) и проект ФС «Ноготков цветки» для включения в Российскую Государственную Фармакопею XII издания.

6. Разработаны проекты ФС на препараты «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий», для которых оптимизированы состав и технология получения.

7. Результаты исследований используются в научных изысканиях и в учебном процессе на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета (акты внедрения от №1 и №2 от 4.09.2007 г.).

Положения, выдвигаемые на защиту:

1. Результаты изучения химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области.

2. Данные результатов исследований по разработке методов стандартизации сырья и препаратов календулы лекарственной.

3. Методики качественного и количественного анализа лекарственного растительного сырья (ЛРС) «Ноготков цветки» и препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» с использованием ГСО рутина.

4. Результаты разработки и определения показателей качества ЛРС и препаратов «Календулы настойка», «Календулы экстракт жидкий».

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Самарского государственного медицинского университета (№ Государственной регистрации 01200105332) и Республиканских программ:

1. «Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений в рыночных условиях» по теме: «Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277).

2. «Разработка методик качественного и количественного анализа сырья и препаратов лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды и флавоноиды» (№ Государственной регистрации 01990007536).

Апробация работы и публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на II Всероссийском съезде фармацевтических работников (Сочи, 2005 г.); на X и XI Всероссийском конгрессе "Экология и здоровье человека" (Самара, 2005; 2006 гг.); на Межвузовской конференции «Аспирантские чтения» (Самара, 2005, 2006 гг.); на конференции, посвященной 25-летию фармацевтического факультета БГМУ (Уфа, 2006 г.); на 62-й Межрегиональной конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2007 г.); на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н. Березнеговской «Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения» (Томск, 2006 г.); на V международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (Минск, 2007 г.); на XII Всероссийской научно-практической конференции «Молодые ученые в медицине» (Казань, 2007 г.); на III Всероссийской конференции «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007 г.); на XIV Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1620 апреля 2007 г.).

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 150 страницах машинописного текста, содержит 17 таблиц, 23 рисунка. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4-х глав, отражающих результаты собственных экспериментальных исследований и их обсуждение, общих выводов, приложения и списка литературы, включающего 198 источника, из которых 60 на иностранных языках.

Заключение диссертационного исследования на тему "Фитохимическое исследование по стандартизации и созданию лекарственных средств на основе календулы лекарственной"

1. В результате изучения химического состава цветков календулы лекарственной, культивируемой в Самарской области, выделены 7 индивидуальных веществ, относящихся к фенольным соединениям (1-

4), каротиноидам (5), сапонинам (6) и стеринам (7).2. Выделенные вещества идентифицированы с помощью УФ-, "Н-ЯМР спектроскопии и масс-спектрометрии, а также различных химических превращений как нарциссин, изокверцитин, кофейная кислота, хлорогеновая кислота, Р-каротин, олеаноловая кислота и Р-ситостерин.3. Установлено, что доминирующий диагностический флавоноид цветков календулы лекарственной нарциссин (3-О-рутинозид изорамнетина) выделен впервые в РФ из сырья данного растения.4. Показана целесообразность проведения стандартизации сырья и препаратов цветков календулы лекарственной по содержанию суммы флавоноидов (количественное определение) и по содержанию доминирующего флавоноида нарциссина (качественные реакции).5. Разработаны методики качественного ТСХ-анализа цветков календулы лекарственной, основанные на обнаружении нарциссина, а также на определении параметров УФ-спектра.6. Разработана методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на ГСО рутина с использованием дифференциальной спектрофотометрии. Ошибка единичного определения содержания суммы флавоноидов с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,40%.7. Содержание суммы флавоноидов в промышленных образцах цветков календулы лекарственной и образцах, культивируемых в Самарской области, находится пределах от 1,05% до 1,63%, что дало основание рекомендовать в качестве нижнего предела показатель «не менее 1,0%».8. Обосновано включение в проект ФС «Ноготков цветки» дополнения к разделу «Качественные реакции» и введение нового раздела «Количественное определение» с регламентацией числового показателя «Сумма флавоноидов в пересчете на рутин не менее 1%».9. Осуществлена оптимизация состава и способа получения лекарственных средств «Календулы настойка» (1:5) и «Календулы экстракт жидкий» (1:2) с использованием в обоих случаях в качестве экстрагента 70% этилового спирта.Ю.Разработаны методики качественного и количественного анализа препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий» с использованием ТСХ и дифференциальной спектрофотометрии.Ошибка единичного определения содержания суммы флавоноидов в настойке и экстракте с помощью разработанных методик с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,65%) и ±4,70% соответственно.11.Определены числовые показатели препаратов «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий»: содержание суммы флавоноидов, сухой остаток, содержание спирта. В качестве нижнего предела содержания суммы флавоноидов (в пересчете на рутин) в настойке и экстракте рекомендованы показатели 0,2% и 0,4%, соответственно.12.На основании экспериментальных данных, полученных в ходе микроскопического и химического изучения, и анализа различных образцов цветков календулы лекарственной {Calendula officinalis L.), оформлены Изменения №1 к ст. 5 (ГФ XI) (письмо №123 от 27.01.05 г.) и проект ФС «Ноготков цветки» для включения в Российскую Государственную Фармакопею XII издания.13.Разработаны проекты ФСП «Календулы настойка» и «Календулы экстракт жидкий», лекарственные средства на основе цветков календулы, обладающие более выраженной антимикробной активностью по сравнению с соответствующими промышленными аналогами.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2007 года, Шарова, Ольга Владимировна

1. Абдуллабекова, В.Н. Разработка метода количественного анализа цветков календулы лекарственной В.Н. Абдуллабекова, А.А. Тулаганов Химико-фармацевтический журнал 2001. Т. 35. 10. 25-26.

2. Авдеева, Е.В. Изучение некоторых фенольных и терпеноидных соединений, используемых в стандартизации лекарственных растений: Автореф. Дис. канд. фармац. наук Е.В. Авдеева. Москва, 1997.-23 с.

3. Акопов, М.Э. Важнейшие отечественные лекарственные растения и их применение М.Э. Акопов. -УзССР «Медицина», 1986 511513.

4. Амасиаци Амирдовлат Не нужное для для неучей. М.: Наука. 1990.-880 с. 5.

5. Анненков, Н Ботанический словарь. -Пб., 1878. 646 с. Анатомический атлас полезных и некоторых ядовитых растений А.А. Никитин, И.А. Панкова. Ленинград, 1982. 290-293.

6. Арзамасцев, А.П. Основные аспекты совершенствования фармакопейного анализа А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, В.Л. Багирова Хим.-фарм. журн. 2000. №5 47-49.

7. Арзамасцев, А.П. Государственные стандартные образцы лекарственных веществ (проект общей фармакопейной статьи) А.П. Арзамасцев, В.Л. Дорофеев, Н.П. Садчикова Ведомости научного центра экспертизы и государственного средств. МЗ РФ, 2000. 3. 24-26.

8. Арзамасцев, А.П. Валидация фармакопейных методов (проект общей фармакопейной статьи) А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, Харитонов Ведомости научного центра Ю.Я. и контроля лекарственных экспертизы

9. Арифходжаев, А.О. Галактаны и галактаносодержащие Химия полисахариды высших растений А.О. Арифходжаев природных соединений 2000. №3 185-197.

10. Ароматерапия: Справ. В.В. Николаевский. М.: Медицина, 2000. 41.

11. Астахова, А.В. Лекарственные травы и биологически активные добавки. Безопасность лекарств. 2000. 1. 83-95.

12. Астахова, А.В. Биологически активные добавки (БАД). Безопасность лекарств. 2000. 4. 12-16.

13. Ахрем, А.А. Тонкослойная хроматография А.А. Ахрем, А.И. Кузнецова. М.: Наука. 1964. 153 с.

14. Багинская, А.И., О.А. Коновалова, В.К. Колхир IV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». 1997. 249.

15. Багирова, В.Л. О стандартизации лекарственных средств на современном этапе В.Л. Багирова, Е.Л. Ковалева, Н.П. Садчикова Хим. фарм. журн. 2001.- Т. 34, 11. 46-47.

16. Багирова, В.Л. Ассортимент лекарственного растительного сырья на фармацевтическом рынке России В.Л. Багирова, И.А. Баландина, Т.А. Сокольская, О.Н. Воробьева, Л.Г. Алехина Новая аптека. 2004. 2. С 57-62.

17. Багирова, В.Л. Ассортимент лекарственных сборов на фармацевтическом рынке России В.Л. Багирова, И.А. Баландина, Т.А. Сокольская, О.Н. Воробьева, Л.Г. Алехина Новая аптека. 2 0 0 4 3 С 65-70.

18. Багирская, А.И. Густой экстракт календулы новое ранозаживляющее средство А.И. Багирская, О.А. Коновалова, В.К. Колхир, Н.Г. Глазова, М.Б. Боровкова, Т.Е. Лескова Человек и

19. Бандюкова, В.А. Исследование флавоноидов некоторых видов растений семейства сложноцветных, бурачниковых и бересклетовых /В.А. Бандюкова, Ф. Джумырко, Н.В. Сергеева, А.Л. Шинкаренко Труды первого всесоюзного съезда фармацевтов: Пятигорск, 1 4 1 9 сент. 1967г.-М.: 1970.-С. 253-258.

20. Беленький, Б.Г. Тонкослойная хроматография. В кн.: Успехи хроматографии. К 100-летию со дня рождения М.С. Цвета. Под р е д К.В. Чмутова и К.И. Сакодынского. М.: Наука. 1972. с. 134-162.

21. Беликов, В.В. Реакции комплексообразования в анализе флавоноидов В.В. Беликов, Т.В. Точкова Фенольные соединения и физиологические свойства. Алма-Ата, 1973. 168-172.

22. Беликов, В.В. Применение ВЭЖХ в анализе флавоноидных их препаратов /В.В. Беликов Проблемы стандартизации и контороля качества лекарственных средств: Мат. докл. всесоюз. конф., 1 8 2 1 декабря 1991.-М., 1991.-Т. 2, ч. 1 С 14-16.

23. Березовская, Т.П. Методы микроскопического анализа ботанических объектов Т.П. Березовская, Н.В. Дощинская, Е.А. Серых. Т о м с к 1978.-113 с.

24. Биофлавоноид кверцетин высокоэффективный антиоксидаыт Савченко Л.В., Мусатова З.И., Высоцкий И.Ю., Сафонов Ю.П.: Д е п в УкрННИНТН 0608.90. 1248 Ук. 90.

25. Бирюк, В.А. Фенольные соединения соцветий Calendula officinalis В.А. Бирюк, В.Т. науки Чернобай и Современные Тез. докл. L. проблемы II съезда фармацевтической практики: фармацевтов Украинской ССР: Тез. докл. II съезда фармацевтов Украинской ССР 1972 г. Киев, 1972. 744-745.

26. Бубенчикова, В.Н. Разработка методов анализа растительного сырья содержащего флавоноиды В.Н. Бубенчикова, Т.В. Точкова Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Дальнем Востоке: Тез. докл. Научо-практической конференции посвященной 50-летию фармацевтического факультета 1991 г. Томск, 1991. 117-118.

27. Бурцева, И.В. Исследование нового вида сырья шрота цветков ноготков И.В. Бурцева, Г.И. Олешко, В.Ф. Левинова и др. Фармация. 2004. №4. 16-18.

28. Бурцева, И.В. Фармакогностическое изучение шрота цветков ноготков после получения настойки: Афтореф. дис. канд. фарм. наук И.В. Бурцева. Пермь, 2004. 22 с.

29. Бурцева, И.В. Оптимальные условия поучения масляного экстракта шрота цветков ноготков И.В. Бурцева, М.С. Чигвинцева, В.Ф. Левинова, Л.К. Бабиян Науки о человеке: Сб. ст. V конгр. молодых ученых и специалистов. Томск: СибГМУ, 2004. 338-339.

30. Васильев, В.П. Аналитическая химия. В 2-х ч. Ч II. Физикохимические методы анализа. Учеб. для химико-технол. спец. вузов. В.П. Васильев. М.: Высш. шк. 1989. 384 с.

31. Вечерко, Л.П. Календулозид А из Calendula officinalis L. Л.П. Вечерко, Э.П. Зинкевич, Н.И. Либизов, А.И Баньковский Химия природ, соединений. 1969. 1. 58-59.

32. Вечерко, Л.П. Строение календулозида А Л.П. Вечерко, Э.П. Зинкевич, Н.И. Либизов, А.И Баньковский Химия природ, соединений. 1971. 1. 22-27.

33. Вечерко, Л.П. Строение календулозида F из корней Calendula officinalis L. Л.П. Вечерко, Э.П. Зинкевич, М. Коган Химия природ, соединений. 1973. 4. 561-562.

34. Вечерко, Л.П. Строение календулозидов С и D из Calendula officinalis L. Л.П. Вечерко, Э.П. Зинкевич, А.Ф. Свиридов, М. Коган Химия природ, соединений. 1975. 3. 366.

35. Видюкова, А.И. О противовоспалительном действии полфенольного препарата из календулы лекарственной А.И. Видюкова, ЯМ. Хаджей, Г.В. Оболенцева Четвертый всесоюзный симпозиум по фенольным соединениям: Тез. докл. Ташкент, 1982. 14-15.

36. Высокоэффективная тонкослойная хроматография Под ред. А. Златкиса и Р.Е. Кайзера (пер. с англ. под ред. д.х.н., проф. В.Г. Березкина). М Мир. 1979. 245 с. 38. ВФС 42-1638-

37. Экстракт календулы жидкий Фармакопейный государственный комитет. Введ. 10.06.87 до 31.12.91. 3 с.

38. Гаевский, А.В. Химическая оценка лекарственных культур проблемы селекции на качество. Изменчивость химического состава растений и аналитический контроль в селекционном процессе А.В. Гаевский, P.M. Иванова, А.И. Брыкин Хим. фарм. журн. 1981. №7. 64-69.

39. Георгиевский, В.П. 50 лет тонкослойной хроматографии В.П. Георгиевский, Ю.В. Шостенко Фармация. 1989. Т. 38, 3. 86-87.

40. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С Е Дмитрук Новосибирск: Наука, Сиб. отд., 1990. 330 с.

41. Гринкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных растений. Учеб. пособие для фарм. вузов Н.И. Гринкевич, И.А. Баландина, В.А. Ермакова и др. М.: Высшая школа, 1983. 176 с.

42. Головкин, Б.Н. О чем говорят названия растений Б.Н. Головкин. М.: Колос, 1992.-192 с.

43. Гордиенко, А.Д. Гепатопротекторный механизм действия флавоноидов А.Д. Горденко Фармация. 1990. Т. 39, 3. 75-78.

44. Государственная Фармакопея СССР МЗ СССР. 10-е изд.- М.: Медицина, 1968.

45. Государственная фармакопея СССР. XI издание, вып. 1 и 2. М.: Медицина, 1991. Т.2 (вып.2). 47. ГОСТ 17768-

46. Средства лекарственные. Упаковка, маркировка, транспортирование и хранение.

47. Государственный реестр лекарственных средств Фонд фармацевтич. информ. Офиц. изд. (по состоянию на 1 сентября 2004 г.) М.: «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава РФ, 2004.

48. Григорьева, Н.А. Биологические особенности возделывания календулы лекарственной и ромашки аптечной при минимальных затратах ручного труда, без применения средств химизации: Автореф. дис. канд. биол. наук Н.А. Григорьева. Москва, 2003. 23 с.

49. Гунар, О.В. Особенностииспытания лекарственного растительного сырья на микробиологическую чистоту О.В. Гунар Фармация. 2003.-Т. 51, 3 С 5-7.

50. Долгова, А.А. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии А.А. Долгова, Е.Я. Ладыгина. М.: Медицина, 1977. С 215.

51. Дрозд, Г.А., Дрозд, Н.Г. Лекарственные растения, содержащие флавоноиды: ограничения для применения. Сборник работ 68-й итоговой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН. В частях. Часть П. Курск: КГМУ. 2002. 215-216. 2-х

52. Дрозд, Г.А. Ограничения и противопоказания для применения лекарственного растительного сырья: Практ. Пособие. Курск-2006. 8 3 с.

53. Жидкостная колоночная хроматография Под ред.

54. Дейла, К. Мацека, Я. Янака (пер. с англ.). М.: Мир. 1978. 428 с.

55. Зайцев, В.М., Прикладная медицинская статистика Лифляндский В.Г., Маринкин В.И. -Пб. Фолиант. 2003. 432 с.

56. Запесочная, Г.Г. Фенилпропаноиды в стандартизации лекарственных растений Г.Г. Запесочная, В.А. Куркин III Международная конференция "Экологическая патология и ее фармакокоррекция": Тез. докл. Чита, 1991. Ч. П. 23.

57. Зимин, В.М. Библиотечка лекарственных растений: собрание народной и научной медицины. В.М. Зимин -Пб.: 1993. Т. I 139-140.

58. Исмагилов, P.P., Костылев Д.А. Календула. P.P. Исмагилов, Д.А. Костылев. Уфа: БГАУ, 2000. 102 с.

59. Казаринова, Н.В. Лекарственные растения Сибири для лечения сердечно-сосудистых заболеваний Н.В. Казаринова, М.Н. Ломоносова, В.М. Триль Новосибирск: Наука. Сиб. Отделение, 1991.-240 с.

60. Кирхнер, Ю. Тонкослойная хроматография. В 2-х томах. Пер. с англ. Под ред. д.х.н., проф. В.Г. Березкина. М.: Мир. -1981. 1139 с.

61. Колесникова, В.Г., Марченко В.А., Сыровежко Н.В. Лекарственные растения: мифы и реальность В.Г. Колесникова, В.А. Марченко, Н.В. Сыровежко -Пб.: СПХФА, 1998.-261 с.

62. Комаров, В.Л. Практический курс анатомии растений В.Л. Комаров. -Пб.: издательство академии наук СССР. 1938. 225-228.

63. Комисаренко, Н.Ф. Флавоноиды соцветий Calendula officinalis L. Н.Ф. Комисаренко, В.Т. Чернобай, А.И. Деркач Химия природ, соединений. 1988. 6. 795-801.

64. Корсун, В.Ф. Лечение кожных болезней препаратами растительного происхождения: Справочник В.Ф. Корсун. Минск: Беларусь, 1995.-С. 15-37.

65. Корсун, В.Ф. 1001 вопрос о фитотерапии. Книга 1: Растения бальзаи для души и тела В.Ф. Корсун, П.А. Захаров, А.А. Корсун. С-Пб.: «Диля», 1999. 14-16.

66. Костенникова, З.П. Количественное определение флавоноидов в настойке календулы методом УФ-спектрофотометрии З.П. Костенникова, Г.А. Панова, Р. Дамбраускеш Фармация. 1984. Т. 3 3 6 С 33-35.

67. Кражан, И.А. Лечение хронического катарального гингивита с применением календулы, иммобилизованной на полисорбе И.А. Кражан, Н.Н. Гаража Стоматология. 2001. №5. 11-13.

68. Крапивина, И.В. Сравнительное изучение химического состава шрота цветков календулы лекарственной и исходного сырья И.В. Крапивина, В.Ф. Левинова, Г.И. Олешко, А.В. Канин Актуальные проблемы в фармацевтической науке и образовании: Мат. межвуз. науч. конф. -Пермь: ПГФА, 2001. 108-109.

69. Кулатаева, А.К. К вопросу разработки препарата для лечения заболеваний пародонта на основе фитокомпозиции этанольных экстрактов и эфирных масел лекарственных растений А.К. Кулатаева, Р.Н. Пак, С М Адекенов V конгресс молодых ученых и специалистов «Науки о человеке»: Сборник статей. Томск, 2004. 174.

70. Куркин, В.А. Физико-химические методы исследования природных биологически активных соединений. Часть I. Хроматографические

71. Куркин, В.А. Иллюстрированный словарь терминов и понятий в фармакогнозии: Учебное пособие для студентов медицинских и фармацевтических вузов, врачей и фармацевтических работников В.А. Куркин, В.Ф. Новодранова, Т.В. Куркина Москва; Самара: ГП «Перспектива», СамГМУ, 2002. 188с.

72. Куркин, В.А. Итоги и перспективы исследований в области создания препаратов на основе лекарственного растительного сырья, содержащего фенилпропаноиды В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, Е.В. Авдеева Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности: Материалы докладов Томск, 2000. 40-42.

73. Куркин, В.А. К вопросу о стандартизации лекарственного сырья содержащего флавоноиды и фенилпропаноиды В.А. Куркин, О.В. Маевская, В.Б. Браславский и др.// Применение хроматографии в пищевой, микробиологической и медицинской промышленности: Материалы Всесоюзной конференции. Геленджик, 1990. 85-86.

74. Куркин, В.А. Физико-химические методы исследования природных биологически активных соединений. Ч.

75. Хроматографические Международной научной конференции. методы: Учебное пособие В.А. Куркин, В.Б. Браславский, Е.В. Авдеева, М.Ф. Сенцов, Л.Д. Климова, И.Ф. Шаталаев. Самара: СамГМУ, 1997.-38 с.

76. Курс органической химии П. Каррер; Пер с немец. В.Э. Вассерберга, Э.М. Левиной, Л.Д. Родионовой; Под ред. М.Н. Колосова. С-Пб.: Гос. Научно-техническое издат. хим. Литературы, 1962.-1216 с.

77. Лавренов, В.К., Лавренова, Г.В. Энциклопедия лекарственных растений народной медицины В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова С Пб.: Издательский дом «Нева», 2003, 272 с илл., с. 90.

78. Ладыгина, Е.Я. Календула лекарственная Е.Я. Ладыгина Фармация. 1992.-Т.40. №4. 84-86.

79. Лекарственные растения государственной фармакопеи 1 и 2 том Под ред. Самылиной И.А., Северцева В.А. М. Анми. 1999, 2003.

80. Лекарственные растения (Растения целители): Справ, пособие А.Ф. Гаммерман, Г.Н. Кадаев, А.А. Яценко-Хмелевский. 4 изд., испр. и доп. М Высш. шк. 1990. 451-452.

81. Лекарственные растения Сибири для лечения сердечно-сосудистых заболеваний Под ред. И.М. Красноборов, С В Казначеев Новосибирск, 1991. 169-171.

82. Лекарственные средства: свойства, применение, противопоказания: Справ. Сост.: М.А. Клюев, Н.М. Богданова, О.А. Волкова; Под ред. М.А. Клюева. М.: Рус. кн., 1993. 575 с.

83. Лечение растениями: основы фитотерапии: Учеб. пособие В.М. Баева М.: ООО «Издательство Астрель», 2004. 202 с.

84. Литвиненко, В.И. Гликофлавоноиды в растениях семейства астровые В.И. Литвиненко, В.Н. Бубенчикова, Т.П. Попова Состояние и развитие фармации в Сибири и на Дальнем Востоке: Тез. докл. Научно-практической конференции посвященной 50-летию фармацевтического факультета 1991 г. Томск, 1991. 156-157.

85. Любимов, Б.И. Опыт оценки безопасности фармакологических средств в России (1991-1996) Проблемы и перспективы: Тез. докл. Всероссийского научного симпозиума. -Пб. 1997.- 299-300.

86. Маринина, Т.Ф. Технология и стандартизация мази календулы на основе геля ПЭО 1500 Т.Ф. Маринина Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного

87. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: Практ.пособие. В.2 т. Т.2. 14 изд., перераб., исправ. и доп. М.: Новая волна, 2000. 608 с.

88. Надиров, К.С. Адсорбция фавоноидов на платиновом электроде К.С. Надиров Химия природных соединений 2000. 4. 176.

89. Налепо, Л.Ф. Гиполипидемическое действие настойки календулы Л.Ф. Налепо Гомеопатия и фитотерапия 1997. 2. 86-87.

90. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация Под ред. Багировой В.Л., Северцева В.А. С-Пб.: СпецЛит. 2001.

91. Никитин, А.А. Анатомический атлас полезных и некоторых ядовитых растений А.А. Никитин, И.А. Панкова. Л., Наука, 1982. С 290-293.

92. Ногаре, Д. Газо-жидкостная хроматография. Теория и практика (пер. с англ.). Д. Ногаре, Р.С. Джувет- Л.: Недра. 1996. 420 с.

93. Носенко, М.А. Подбор лекарственных трав для конструирования косметического противовоспалительного средства М.А. Носенко Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Материалы 58-й межрегиональной конференции по фармации и фармакологии. Пятигорск, 2003. 343-346.

94. Носов, A.M. Лекарственные растения A.M. Носов. М.: ООО «Издательство «Эксмо», 2004. 350 с.

95. Олешко, Г.И. К рациональному использованию листьев земляники и цветков ноготков Г.И. Олешко, О.В. Петухова, И.В. Крапивина, В.Ф. Левинова Человек и лекарство: Тез. докл. X Рос. нац. конгр., Москва, 2003 г. М., 2003. 643.

96. Олешко, Г.И. Перспективы использования лекарственных средств календулы лекарственной и земляники лесной Г.И. Олешко, Г.А. Иванова, И.В. Крапивина, В.Ф. Левинова, О.В. Петухова Человек и

97. Омельчук, М.А. Календула лекарственная источник сырья для новых лекарственных препаратов М.А. Омельчук Современные методы исследования лекарственных растений: Научные труды. Т. XX.-М., 1983.-С.188-192.

98. Пастушенков, Л.В., Лесиовская, Е.Е. Фармакотерапия с основами фитотерапии Л.В. Пастушенков, Е.Е Лесиовская Ч. I, II. С- Пб.: СПХФИ, 1995.

99. Патент РФ №2 134584 на изобретение «Способ получения иммуномодулирующего препарата «Настойка эхинацеи пурпурной» В.А. Куркин, В.В. Косарев, О.И. Авдеева, Е.В. Авдеева, П.Г. Мизина, А.В. Жестков; заявитель и патентообладатель Самарский государственный медицинский университет. А61К35/78. Бюл. 23 от 20.08.99

100. Патент РФ №2121358, приор на изобретение «Лекарственные формы для лечения гнойных ран и способ лечения гнойных ран С В Первушкин, А.А.Сохина, М.О. Тархова, В.А. Куркин, Е.А. Столяров //приор, от 30.07.964 зарег. 10.11.98, бюл. №31. ЮО.Просовский, М.А. Перспективы использования сырья календулы после получения настойки М.А. Просовский, Г.И. Олешко, И.В. Крапивина и др. Перспективы использования естественных наук в высшей школе: Тр. междунар. науч. конф. Пермь, 2001. Т.4. 194-198. 101. Прохорова, Л.В. Разработка фармакопейных статей на препараты календулы цветки и календулы настойка Л.В. Прохорова, Н.П. Антонова, Е.И. Богданова, Л.И. Замараева Человек и лекарство: Тез. докл. XI Рос. нац. конгр., Москва, 2004 г. М., 2004. 890891.

102. Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. под ред. Е.Н. Вергейчика, Н.Н. Каревой Пятигорская ГФА, -Пб. ГХФА. Пятигорск, 2007. 207-208.

103. Растения для нас: Справочное издание Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой. -Пб.: Учебная книга, 1996. 654 с.

104. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Л.: Наука, Т. 1-7, 1987-1993. Ю

105. Самылина, И.А. Основные направления исследований лекарственных растений на современном этапе И.А. Самылина, И.С. Грицаенко, Н.К. Горчакова Современные аспекты изучения лекарственных растений: Научные труды. Т. XXXIV. М., 1995. 3-6. Ю

106. Северцева, О.В. Изучение каротиноидов бархатца крупноцветкового (Tagetes erekta) и календулы лекарственной {Calendula officinalis L.) О.В. Северцева Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Материалы IV Международного съезда, Великий Новгород, 29 июня 1 июля, 2000 г 2 0 0 0 С 318-320.

107. Слуева, Е.К. Оценка содержания суммы флавоноидов в настойке календулы Е.К. Слуева, Е.Н. Жукович, Л.А. Шарикова, Т.Ф. Прибыткова, Е.Б. Деревщикова Фармация. 2003.-Т.51, 1. 13-15. 1 Ю.Смирнова, Л.П. Особенности применения стандартного рутина в анализе растительного сырья, образца и витаминных фитопрепаратов Л.П. Смирнова, С. Николаева, В.А. Быков, Л.В. Яковлева и др. Химико-фармацевтический журнал 2000. Т. 34. 1.С. 29-31.

108. Смирнова, Л. Календула, или ноготки лекарственные, золотой ключ к долголетию Авт.- сост. Л. Смирнова. М.: ACT; Мн.: Харвест, 2005. 64 с. П

109. Соколов, Я. Фитотерапия и фитофармакология: Рук. для врачей. Я. Соколов. М.: Медицинское информационное агенство, 2000. 224-228.

110. Соколов, Я. Сравнительное исследование стимулирующих свойств некоторых фенилпропаноидов Я. Соколов, В.П. Бойко, В.А. Куркин Хим. фармац. журнал. 1990. Т. 24, 10. 66-68.

111. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия): Справ. Сост.: Я. Соколов, И.П. Замотаев. М.: Медицина, 1988. 463 с.

112. Справочник лечебных средств и терапевтических методов The prevention how to dictionary of healing remedies and techniques: Более 350 различ. методов лечения: Пер. с англ. М.: Рипол классик,2001. 4 7 2 с ил. Пб.Тахтаджан, А. Л. Жизнь растений. Цветковые растения А.Л.Тахтаджан, Ан. А.Федоров. М.:Просвещение, 1981. Т. 5. Ч. 2. 468-469. 117.ТУ 64-4-72-88. ОКП 93 7662 0491 05 Плод облепихи сухой (Взамен ТУ 64-4-72-86). Введ. 01.05.88. 8 с.

113. Тумаков, А. Хроматография на бумаге и в тонком слое. Теория и практика. Учеб. пособие для студентов, врачей и фармацевтов А. Тумаков, Р.А. Тимирбулатов, В.Я. Кириллова. Самара, СамГМУ, 1999.-70 с.

114. Турищев, Н. Фитотерапия ревматических болезней Н. Турищев Фармация. 2003. Т. 51, 4. 46-48.

115. Турова, А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение А.Д. Турова. М., «Медицина», 1974. 218-222.

116. Фадеева, О.В. Исследование некоторых представителей семейства Астровых (сложноцветных) на содержание

117. Фармакогнозия. Атлас. Учеб. пособие для студентов фармацевт, интов и фармацевт, фак-тов мед. ин-тов Е.Я. Ладыгина, Н.И. Гринкевич, И.А. Самылина и др.; Под ред. Н.И. Гринкевич., Е.Я. Ладыгиной. М.: Медицина, 1989. 511 с ил. (Учеб. лит. для студентов мед. ин-тов Фармацевт, фак-т).

118. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов В.А. Куркин. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2004. -1180 с.

119. Фармакология: Учеб. Д.А. Харкевич 9-е изд., перераб., доп. и испр. М.: ГЭОТАР Медиа, 2006. 736 с ил.

120. Федеральное руководство для врачей по использованию лекарственных средств (формулятивная система). Вып. 1. М.: ГЭОТАР Медицина, 2000. 974 с.

121. Федоров, А.А. Атлас по описанию и морфологии высших растений. Соцветие А.А. Федоров, З.Т. Артюшенко. -Пб.: Наука, 1979. 296 с.

122. Фитотерапия с основами клинической фармакологии: Справ. Под ред. В.Г. Кукеса. М.: Медицина, 1999. 192 с.

123. Флора СССР Под ред. В.Л. Комарова. Москва-Ленинград: Издательство академии наук СССР, 1961. Т. 26. 857-860. 129.ФСП 42-02061363-

124. Календулы настойка Фармакопейный государственный комитет. Введ. 27.06.01 до 27.06.06. 6 с.

125. Хакимова, Д.Р. Унификация методов стандартизации флавоноидов в процессе производства препаратов боярышника, зверобоя и календулы: Афтореф. дис. канд.фарм. наук Д.Р. Хакимова. Москва, 1994. -24 с.

126. Харитонов, Ю.Я. Аналитическая химия (аналитика). В 2 кн. Кн.

127. Количественный анализ. Фимзико-химические (инструментальные) методы анализа: Учебник для вузов. М.: Высш. Шк. 2001. 559 с ил.

128. Чернобаева, М.Г. Адсорбционная и ингибирующая активность календулы и фурацилина на полисорбе в отношении микрофлоры ротовой полости М.Г. Чернобай Актуальные вопросы клинической стоматологии- 1997. 16-17.

129. Шаршунова, М. Тонкослойная хроматография в фармации клинической биохимии М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалеи,. М.:Мир, 1980.-Т. 1,2.

130. Энциклопедия лекарственных растений. Пер. с немец. Предисл. И.А. Губанова. М., Мир, 1998. 209-210.

131. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: Учеб. пособие Под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. -Пб.: Спец. лит., 1999. 407 с.

132. Balza F., Towers G.H.W., Phytochemistry, 1984. Vol. 23, 10. P. 2333.

133. Bauer, R., Wagner H. Echinacea: Handbuch fur Arzte Apotheker i i n d andere Naturwissenschaftler.-Stuttgart: Wissenschaftliche Verlagsgeselschaft, 1990. -182 s.

134. Extracts of plants and thear cosenelis application. Part YII Chimical cheracteristies of extracts from. onfloresceuces of marigold {Calendula officinalis L.). 147.CA. 1983, 99, №15, 119372 g. The stereochemistry of hydroxylation the carotenoid Rutein or Calendula officinalis I B.V. Milborrow Phytochem. 1982. 21 (12), 2853-7. 148.CA. 1885, 102, №23, 201209 y. Value of Calendula officinalis L_ inflorescences as a tannin source /

135. Declio Herba Pol. 1983. 29 (3-4) 211-16. 149. CA. 1985, 103, №3, 19919 y. Changes in the levels of prenyeguinones a n d tocopherols in Calendula officinalis during vegetation W. Iaiszowska, I_ Rygier Physiol. Plant,l 985, 63(4), 425-30.

136. Chemli, R., et al. Arvenoside A and B, triterpenoid saponins frorrx Calendula arvensis R. Chemli, A. Badadjamian, R. Faure, K. Boukef, Gr. Balansard, E. Vidal Phytochemistry. 1987. Vol. 26, №6. P. 1785-1786.

137. Chemli, R., et al. Etude des acides amines de Calendula arvensis eix arvensis Maire R. Chemli, K. Boukef, G. Balansard, A. Gayte-Sorbier Plant, med. phytother. 1986. T. 20, №3. P. 203-209.

138. Cholc V.S A Simple Assembly for Rapid Measurements of R, in Paper t Chromatography Biiochemical Educaiion (IUB) Pergamon Press. Oxford, UK t 1982, V. 10, 1. p 26-26/

139. Danzer, K. Three- and higher-dimensional calibration in analytical chemistry: Abstr. 14 th Sernin. Atom. Spectrochem., Hightatraso f Podbanske, Sept. 7-11, 1998 K. Danzer ISP Inf. Newslett. -1999.- Vol. 24, №8. P. 642.

140. Dean P D G, Johnson W S, Middle F A Ed Affinity Chromalography i. A Practical Approach 1RL Press. Oxford, England 1985. 215 p.

141. Ellis, B.E. Natural products from plant tissue culture B.E. Ellis Phytochemistry. 1988. Vol. 5, N. 9. P. 581-612.

142. Ellis, B.E. Phytochemistry- 1983 -vol. 22, 9 P:1941 1943.

143. European Pharmacopoeia. 3 r d Edn. 1

144. Strasbourg. Council of Europe. 1996.-1800 p.

145. European Pharmacopoeia, Ttchnical Guide for the Elaboration Monografs, 3 r d ed., Strasbourg: Council of Europe. 1999.

146. Flavonoid and antioxidant agents: impotance of their interaction with biomembranes F. Saija, M. Scalese, M. Lanza et al. Free Radical Biol.Med.-1995.- Vol. 19, 4.- P. 481-486.

147. Forgacs E., Cserhati T. Molecular Bases of Chromatographic Separation. Springer-Verlag, Heidelberg, Germany. 1997. 288 p.

148. Gaspar, G. Cromatographie in plase gazeuse. Pasymetrir de de pin nest pas une fatalite /G. Gaspar Srectra anal. 1997.- Vol.26, 199. -P.3637.

149. Geisman, T.A. The chemistry of flavonoid compounds T.A. Geisman.Oxford; London; New-York; Paris, 1962.- 666 p.

150. Haslam, E. Natural polyphenols (vegetable tannins) as drugs: possible modes of action E.Haslam// J. Nat. Prod. 1996. 59. P. 205-215.

151. Hartwell, J.L. Plants used against cancer Lloidia. 1968. Vol. 31, N 2. P. 71-170.

153. Berlin; New York, 1975. Bd 1. 1311 S. 166.1sraelsen, L.D. 1

154. Phytomedicines as a new crop opportunity, p. 669671. 167.1n: J. Janick and J.E. Simon (eds.), New crops. Wiley, New York. J Nat Prod. 1987Nov-Dec; 50(6): 1059-64. of

155. Karrer, W. Konstitution und Vorkommen der organischen Pflanzenstoffe. Basel-Boston-Stuttgart: Birkhauser Verlag, 1985.- Erganzung 2.- Teil 2.2328 s.

156. Kirchner, J.G. Eds. Thin Layer Chromatography Techniques of Chemistry, Vol XIV Part 1 Techniques Part 2 J.G. Kirchner, E.S Perry Applications 2nd ed -Sigma Chemical. U.S.A. -1990 1137 p.

157. Kurkin, V.A. Phenylpropanoids: perspective biologically active compounds of medicinal plants V.A. Kurkin Physical-chemical Basis of Plant Physiology: Absracts of Annual Symposium. Pushchino, 1996. P. 147.

158. Kurkin, V.A. Phenylpropanoids as biologically active compounds and standards of the medicinal plants V.A. Kurkin, V.N. Ezhkov, E.V. Avdeeva and all Polyphenols communications 2004. XXII International Conference on Polyphenols Helsinki 2004. P. 619-620.

159. Kurkin, V.A. Phytochemical and Pharmacologycal investigation of some medical plants conenting flavonoids V.A. Kurkin, A.N. Dubishchev, E.V. Avdeeva Polyphenols communications 2006. XXIV International Conference on Polyphenols Winnipeg, Manitoba, Canada, 2006. P. 513-514.

160. Mabry, T.J. The Systematic Identification of Flavonoids T.J. Mabry, K.R. Markham, M.B.Thomas Springer Verlag: Berlin Heidelberg N e w York.-1970.-354 p.

161. Martens, S. Biochemical properties of dioxygenases involved in flavonoid biosynthesis in parsley: an evolutionary aspect S.Martens and al. XII International Conference on Polyphenols. Helsinki, 2004. P. 31-32. 175.0kuda, T. In Polyphenolic phenomena T. Okuda Scalbert, A., Ed., INRA Publications: Paris, 1993. P 221-235.

162. Poole, CF Chromatography today CF Poole, SK Poole. Amsterdam: Elsevier Science 1 9 9 1

163. Pinkas, M., Torek, M., Perrin E., Recherches sur la composition du Sonsides champs C. r. Acad. sci. D. 1975. T. 281, N. 5-8. P. 447-450.

164. Polyphenolic compounds with biological and pharmacological activity Herbs Spices Medicinal Plants T. Adzet 1986. №1. S. 167-184.

166. Rice-Evans, С Structure-antioxidant activity relationship of flavonoids and phenolic acids C. Rice-Evans, N J Miller, G. Paganga Free Radical Biol.Med.-1996.- Vol. 20, 7.- P. 933-956.

167. Reich, E. Современный ТСХ анализ препаратов и на основе по растительного сырья. Критический обзор предложения улучшению методик Е. Reich, A. Blatter, В. Meier Handbook of Thin-Layer Chromatography 3 r d ed, Chapter 18. New York: Dekker; 2003 (in print).

168. Robert, A., Nejamis I.E. Am. J. Physiol. 1983. V. 245. P. 113-121.

169. Singia, A.K. Quantitative spectrofluoromet determination of flavonoids and their glycosides A.K. Singia, Kamla Pathak Indian J. Pharm. Sci. 1991.-Vol. 53,№l.-P.27-30.

170. Sheffer, J.J.C. De goudsbloem (Calendula officinalis) als geneeskruid in verleden en heden. «Pharmaceutisch week-blad», 1979, v. 114, №42, p. 1149-1157.

171. Shimizu, N., Tomoda, M., Kanari, M., Gonda, R., Satoh, A., Satoh, N., Chem. Pharm. Bull., 38, №11, 3069 (1990)

172. Shimizu, N., Tomoda, M., Takada, К., M., Gonda, R., Satoh, Chem. Pharm. Bull., 40, 2125 (1992)

173. Sen, A.K., Das A.K., Banerji N., Indian, J. Chem. B, 32, 862 (1993)

174. Sprecher, E. Modedrogen Z. Phytotherapie. 1990. V. 11. 4. P. 103-112.

175. Tomoda, M., Shimizu, N., Kanari, M., Gonda, R., Arai, S., Okuda, Y., Chem. Pharm. Bull., 38, №6, 1667 (1990) 190.The Flavonoids Ed. by J.B. Harborne, T.J. Mabry, H. Mabry. London: Chapman and Hall, 1975. -1204 p. 191. The Flavonoids: Advances and Research Ed. by J.B. Harborne, T.J. Mabry. London: Chapman and Hall, 1982. 744 p. 192. The standart addition methodology for evaluation of resalts Analisis. 1997. Vol.24, №9-10.- P. 374-380.

176. Thin-Layer Chromatography, general metod 2.02.27.00. In: Eur. 4th ed. Strasbourg: Council of Europe. 2002.

177. Touchslone J.C. Practice of Thin Layer Chromatography, 3rd Ed. John Wiley Sons, New York. U.S.A. -1992 416 p.

178. Tyler, V.E. 1987. The new honest herbal. George F. Stickley Company, Philadelphia.

179. Wagner H. Die DC- und HPLC-Analysis der Eleutherococcus Droge H.Wagner, Y.H. Heuer, A. Obermeier et al. Planta Medica. -1982. Vol. 44, N. 2. P. 193-198.

180. Wagner, H. Pharmazeutische Biologie. Drogen und ihre Inhaltsstoffe. Stuttgart-New York: Gustav Fischer Verlag, 1993.- 522 s.

181. Wagner H., Bladt S. Plant Drug Analysis: A Thin Layer Chromatography Atlas. Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg New York, 1995. 384 p. in chromatographic analysis M.G. Bagur, D. Gazguer, M. Sanchervinas ets

182. Показатель качества Внешние признаки Нормируемое значение 4. 5. 6. 7.

183. Числовые показатели Экстрактивных веществ, Не менее 35% извлекаемых 70% спиртом Содержание

184. Побуревших корзинок Других частей растения (кусочков стеблей и листьев) Органической примеси Минеральной примеси Микробиологическая чистота Не более 3 Не более 3 Не более 0,5% Не более 0,5 В соответствии с ГФ XI, вып. 2, стр. 187 и Изменением 3 к ГФ XI от 19.06.03 г., категория 4А. Измельченное сырье. Отклонение от номинальной массы в пачке не должно быть более 5 (по ОСТ 64-4-338-85). В соответствии с требованиями ВДУ ГН 2.6.005-93 В соответствии с ГОСТ 6077-80 и ГОСТ 17768-

185. Отклонение средней массы от номинальной Содержание

187. Срок годности Фармакотерапевтическая группа Внешние признаки. Цельные или частично осыпавшиеся корзинки диаметром до 5 см, без цветоносов или с остатками цветоносов длиной не более 3 см. Обвертка серо-зеленая, одно-двухрядная; листочки ее линейные, заостренные, густоопушенные. Цветоложе слегка выпуклое,

188. Микропрепарат поверхности верхнего эпидермиса с нижней стороны язычкового цветка календулы лекарственной (фото *1344): 1. -простой волосок с длинной конической клеткой; 2. -железистый однорядный волосок с многоклеточной головкой; 3. -простой двурядный волосок. Рисунок

189. Микропрепарат отгиба язычкового цветка. Цветок календулы лекарственной. Нижний фрагмент отгиба цветка (фото х 184,8)

190. Микропрепарат нижней поверхности эпидермиса язычкового цветка календулы лекарственной, (фото х924): 1. -мезофилл (представлен тонкостенными, однородными, паренхимными клетками); 2. межклетники; 3. хромопласты. Рисунок

191. Микропрепарат верхнего фрагмента язычкового цветка календулы лекарственной (фото х 184,8)

192. Микропрепарат пыльцы календулы лекарственной (фото *1344). Рисунок

193. Микропрепарат верхней свободной части отгиба трубчатого цветка календулы лекарственной (фото х924): 1. -пыльца; 2. -клетки эпидермиса (сильно вытянуты в форме сосочков).

194. Микропрепарат нижнего части отгиба трубчатого цветка (общий вид) календулы лекарственной (фото 184,8): 1., 2., 3. разновидности двурядных железистых волосков.

195. Микропрепарат листочка обертки цветка календулы лекарственной (фото х1344): 1. -простой волосок с длинной конической клеткой; 2. -железистый волосок с двурядной ножкой; 3. -простой однорядный волосок.

197. Приготовление раствора диазобензолсульфокислоты. 0,01 г диазобензолсульфокислоты (ГФ X, стр. 876) растворяют в 10 мл 10 раствора натрия карбоната. Раствор используют свежеприготовленным. 3. 0,3 Приготовление г 10% раствора фосфорновольфрамовой (ГФ X, стр. 912) кислоты в 95 этиловом спирте. фосфорновольфрамовой кислоты растворяют в 0,8 мл разведенной хлористоводородной кислоты и разбавляют спиртом этиловым 95% до 10 мл.

198. Приготовление рабочего стандартного образна 0-каротина. 1 мл облепихового масла растворяют в 10 мл хлороформа. Числовые показатели. Экстрактивных веществ, извлекаемых 70% спиртом, не менее 35%; содержание

201. Транспортирование. В соответствии с ГОСТ 17768-90 и ГОСТ 607

202. Хранение. В соответствии с ГОСТ 6077-80 и ГФ XI, вып. 1, с.

203. Срок годности. 2 года. Фармакологическая группа. Антисептическое, противовоспалительное средство. Примечание. Реактивы и методики определения числовых показателей, приведенные в настоящей фармакопейной статье, описаны в соответствующих

204. Числовые показатели Сумма флавоноидов в УФ-спектрофотометрия Количественное определение (УФ- пересчете на рутин не менее спектрофотометрия) 0,20% Тяжелые металлы Не более 0,001% По ГФ XI, вып. 2, стр.

205. Спирт Не менее 65% ГФХ1, вып. 1, стр.

206. Сухой остаток Не менее 4,0 ГФ XI, вып. 2, стр.

207. Микробиологическа ГФ XI, вып. 2, стр. 193 и Категория 4А Изменение от 28.12. 1995 г. я чистота Номинальный 25 мл (±5%). 30 мл (±3%). ОСТ 64-492-85 объем По 25, 30 мл во флаконы ФВУпаковка 30-20-ОС-1 и ФВ-50-20-ОС-1 по ОСТ 64-2-71-80, укупоренные полиэтиленовыми пробками типа 3.1-20 или 3.220 и навинчиваемыми пластмассовыми крышками типа 1.1-20 по ОСТ 64-2-81 или по 25 мл во флаконыкапельницы по ТУ 64-2-208-79, укупоренные пробкамикапельницами и крышками навинчиваемыми по ТУ 64-264-2-

208. Каждый флакон вместе с инструкцией по применению

209. Транспортирование Содержание

210. Групповая и транспортная упаковка в соответствии с ГОСТ 17768-90 и РД 93010015-05749470-

211. Маркировка упаковочного листа в соответствии с ГОСТ 17768-

213. Ультрафиолетовый спектр раствора Б, приготовленный для количественного определения, должен иметь полосы поглощения с максимумом при 256 нм и «плечом» при 350 нм. желтого цвета с буроватым запахом. Должна соответствовать

216. Приготовление раствора диазобензолсулъфокислоты. 0,01 г диазобензолсульфокислоты (ГФ X, стр. 876) растворяют в 10 мл 10 раствора натрия карбоната. Раствор используют свежеприготовленным. 3. 0,3 Приготовление г 10% раствора фосфорноволъфрамовой (ГФ X, стр. 912) кислоты в 95% этиловом спирте. фосфорновольфрамовой кислоты растворяют в 0,8 мл разведенной хлористоводородной кислоты и разбавляют спиртом этиловым 95% до 10 мл.

217. Каждый флакон вместе с инструкцией по применению упаковывают в коробку из картона коробочного типа хром-эрзац или марки А по ГОСТ 7933-89. На флаконы и коробки наклеивают этикетки из бумаги этикеточной по ГОСТ 7625-86 или бумаги писчей по ГОСТ 1851

218. Групповая и транспортная упаковка в соответствии с ГОСТ 17768-90 и РД 9301-0015-05749470-97.

219. Маркировка транспортной тары в соответствии с ГОСТ 14192-

220. Транспортирование. В соответствии с ГОСТ 17768-

221. Показатель качества Описание Нормируемое значение Используемый метод Визуальная оценка на соответствие требованиям ГФ XI, вып. 2, стр. 160. 1) УФ-спектроскопия; 2) Тонкослойная хроматография (ТСХ-анализ); система растворителей: хлороформ-метиловый спирт-вода (26:14:3). УФ-спектрофотометрия По ГФ XI, вып. 2, стр. 161. ГФХ1, вып. 1, стр. 26. ГФ XI, вып. 2, стр.

223. Прозрачная жидкость темнокоричневого цвета, со специфическим запахом, горьковатого вкуса Подлинность 1) щах=360нм±2нм (нарциссин). 2) Пятно светло-желтого цвета с Rf около 0,5 (нарциссин); имеющее по отношению к пятну ГСО рутина значение Rs около 1,

224. Каждый флакон вместе с инструкцией по применению

225. Групповая и транспортная упаковка в соответствии с ГОСТ 17768-90 и РД 93010015-05749470-

226. Маркировка упаковочного листа в соответствии с ГОСТ 17768-

227. Маркировка транспортной тары в соответствии с ГОСТ 1419296. В соответствии с ГОСТ 1776890 В соответствии с ВДУ ГН Радиационный контроль 2.6.005-93 В прохладном, защищенном от света месте 2 года Антисептическое, противовоспалительное средство

228. Маркировка 11. 12. 13. 14.

229. Транспортирование Содержание

230. Подлинность. 1) Ультрафиолетовый спектр раствора Б, приготовленный для количественного определения, должен иметь полосы поглощения с

233. Каждый флакон вместе с инструкцией по применению упаковывают в коробку из картона коробочного типа хром-эрзац или марки А по ГОСТ 7933-89. На флаконы и коробки наклеивают этикетки из бумаги этикеточной по ГОСТ 7625-86 или бумаги писчей по ГОСТ 18510-

234. Групповая и транспортная упаковка в соответствии с ГОСТ 17768-90 и РД 9301-0015-05749470-

235. Маркировка. Маркировка упаковочного листа в соответствии с ГОСТ 17768-

236. Маркировка транспортной тары в соответствии с ГОСТ 14192-

237. Транспортирование. В соответствии с ГОСТ 17768-

238. Проект дополнений и изменений

239. Пояснительная записка -3 экз. -3 экз. У Ректор Г.П. КОТЕЛЬНИКОВ (2-

240. Проект ФС «Ноготков цветки»

241. Пояснительная записка к ФС 3 экз. 3 экз. Ректор ГЛ. КОТЕЛЬНИКОВ

242. Проект ФС «Ноготков цветки»

243. Пояснительная записка к ФС 3 экз. 3 экз. Ректор Г.П. КОТЕЛЬНИКОВ

244. Методики качественного (ТСХ-анализ) и количественного анализа (дифференциальная спектрофотометрия) цветков календулы лекарственной.

245. Методики качественного и количественного анализа препаратов "Календулы настойка" и «Календулы экстракт жидкий» с учетом принципа унификации методик в ряду лекарственное растительное сырье субстанция лекарственная форма.

246. Проект ФС на лекарственное растительное сырьё "Ноготков цветки".